EV71病毒受體、Toll樣受體及其相關信號通路在EV71感染死亡病例中的影響及意義.pdf

1、目的：最近幾年已有研究通過體外細胞實驗鑒定出EV71病毒除了有SCARB2這一特異性細胞表面受體之外，還存在另外兩種特異性細胞表面受體，即PSGL-1、Annexin A2。在EV71感染人體組織中有2篇文獻報道與PSGL-1有關，而無文獻報道Annexin A2。同時，有研究表明TLR3和TLR8分別可以識別某些雙鏈RNA病毒、單鏈RNA病毒，然而未見在人體組織中探討TLR/MyD88下游信號分子在EV71感染所致重癥手足口病中的影響

2、。因此，本研究擬通過免疫組化法檢測PSGL-1、Annexin A2是否在EV71感染時提供入侵人體組織的基礎；探討TLR3 mRNA和TLR8 mRNA在EV71感染中的意義；闡明TLR/MyD88下游信號轉導分子IRAK-1、TRAF-6、NF-κB p65在EV71感染所致炎癥反應中的作用。
　　方法：將9例EV71感染死亡病例（EV71組）作為研究對象,7例非感染性疾病死亡病例（對照組）作為對照，研究已通過本院倫理委員會審

3、核及批準同意，所有死亡病例家長均已簽尸檢知情同意書。采用免疫組化（IHC）法檢測PSGL-1、Annexin A2、TLR3、TLR8、IRAK-1、TRAF-6及NF-κB p65的表達，采用原位雜交（ISH）法檢測TLR3 mRNA和TLR8 mRNA的表達。應用Image Pro Plus version6.0(IPP6.0)圖像分析軟件檢測圖片陽性積分光密度（IOD）值，再用SPSS18.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析。
　　結

4、果：（1）EV71受體檢測結果：IHC法檢測顯示PSGL-1和Annexin A2在EV71組和對照組肺、腦組織中均有陽性表達，在EV71組肺組織中的IOD值分別為125033、9376，在對照組肺IOD值分別為60939、4179，兩組比較，P＜0.05；PSGL-1和Annexin A2在EV71組腦組織中的IOD值分別為49871、39883，在對照組腦組織中的IOD值分別為9932，3810，兩組比較， P＜0.05。（2）TL

5、Rs檢測結果：①ISH法檢測肺組織TLR3 mRNA，EV71組9例中有4例、對照組7例中有3例肺泡上皮細胞、支氣管壁上皮細胞、中性粒細胞、單核-巨噬細胞胞漿呈陽性；ISH法檢測腦組織TLR3 mRNA，EV71組9例中僅1例有少許小膠質細胞呈弱陽性,對照組均呈陰性表達。IHC法檢測顯示EV71組9例肺、腦組織TLR3均呈現(xiàn)陽性表達。②ISH法檢測肺組織TLR8 mRNA,在EV71組9例中有4例、對照組7例中僅1例部分支氣管壁上皮細胞

6、、肺泡上皮細胞、中性粒細胞胞漿呈陽性；ISH法檢測腦組織TLR8 mRNA,在EV71組9例中僅1例、對照組7例中有2例神經(jīng)細胞、小膠質細胞、淋巴細胞的胞漿可見陽性表達。IHC法檢測顯示EV71組9例肺、腦組織TLR8均呈現(xiàn)陽性至強陽表達。（3）IHC法和ISH法檢測陽性表達得分比較：IHC法和ISH法分別檢測EV71組肺組織中TLR3、TLR3 mRNA的陽性表達得分分別為3.78±0.67、1.11±0.93；在EV71組腦組織中T

7、LR3、TLR3 mRNA的陽性表達得分分別為3.33±0.5、0.89±0.67。IHC法和ISH法分別檢測EV71組肺組織中TLR8、TLR8 mRNA的的陽性表達得分分別為5.22±0.83、1.44±0.53；在EV71組腦組織中TLR8、TLR8 mRNA的的陽性表達得分分別為4.56±0.73、0.78±0.67。兩種檢測方法的陽性表達得分在各組間差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。（4）TLRs信號傳導分子檢測結果：免疫組

8、化法檢測顯示IRAK-1、TRAF-6和NF-κB p65在兩組肺、腦中均有陽性表達，在EV71組肺組織中IOD值分別為15198、10605、78733，在對照組肺組織中IOD值分別為123613、56820、5165，兩組比較，P均小于0.05；IRAK-1、TRAF-6和NF-κB p65在EV71組腦組織中的IOD值分別為8324、3240、35855，在對照組腦組織中IOD值分別為20079、7179、5251，兩組相比，P均