轉(zhuǎn)座酶Tn3體外定向進化.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、論文答辯日期碩士學(xué)位論文密級公玨編號——Tn3體外定向進化李曉劍研究方向塞查籃剖皇組織胚臉堂指導(dǎo)教師鍪塞強亙生塾拯2011—5—30答辯委員會主席魚匿隆撾教援論文評閱人魚臣隆撾塑援迕典逝研究員轉(zhuǎn)座酶Tn3體外定向進化摘要Tn3是存在于生物體內(nèi)的一種非常重要的轉(zhuǎn)座酶，為了提高轉(zhuǎn)座酶Tn3的酶活力，本實驗以重組EcoliDH5a／pBAD33Tn3為親本，采用易錯聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)技術(shù)與DNA重排相結(jié)合的方法對轉(zhuǎn)座酶Tn3進行體外定向

2、進化研究。主要研究結(jié)果如下：①為了對Tn3進行克隆，首先要進行引物設(shè)計，經(jīng)引物設(shè)計軟件Primer50最終確定其上游引物PI：5’CGATCGCTTAAGCTCGAGTCCACC3’下游引物PII：5’TCGW—rACCTCGACl]隊C1m盯CCTC3’。②為了確定PCR擴增最優(yōu)反應(yīng)體系，將單因素法與均勻設(shè)計相結(jié)合，分別對多個影響因素進行考察，最終的PCR反應(yīng)體系為：DNA模板30ng、引物P1／P211I_tmolL～、eachdN

3、TP175I_tLmolL～、10X緩沖液lpL、MgCl2251amolL。和taqDNA聚合酶1U。擴增程序為：95“C120sec／95。C20see，64。C30sec，72C50sec／72。C10minx32個循環(huán)。③為了確定易錯PCR擴增最優(yōu)反應(yīng)體系，運用均勻設(shè)計法對易錯PCR反應(yīng)體系進行考察，最終確定的反應(yīng)體系為：MnCl205mmolL—MgCl27mmolL‘1lOx緩沖液1pLdATP／dGTP02mmolLJdT

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