波形蛋白與DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ在病理性瘢痕中的表達(dá).pdf

1、目的:皮膚燒、創(chuàng)傷后的過(guò)度修復(fù)常導(dǎo)致病理性瘢痕的形成,作為主要修復(fù)細(xì)胞之一的成纖維細(xì)胞,其異常增殖和過(guò)度分泌是瘢痕過(guò)度增生和持續(xù)存在的主要原因。DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ通過(guò)調(diào)節(jié)DNA結(jié)構(gòu)變化在生物體內(nèi)發(fā)揮重要作用,TopoⅡ又分為α和β兩種亞型,TopoⅡα主要存在于增殖的細(xì)胞中,參與細(xì)胞有絲分裂;TopoⅡβ主要存在于增殖不典型的細(xì)胞,通過(guò)調(diào)節(jié)染色質(zhì)構(gòu)型變化參與基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控。二者在病理性瘢痕成纖維細(xì)胞中表達(dá),目前尚未見(jiàn)報(bào)道。為此,本研究比較

2、了波形蛋白及DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱα、β在病理性瘢痕、成熟瘢痕和正常皮膚中的表達(dá)情況,探討TopoⅡ與成纖維細(xì)胞生物學(xué)特征的關(guān)系及它們?cè)隈：坌纬芍械淖饔谩?br>　　 方法:標(biāo)本收集:收集邢臺(tái)人民醫(yī)院燒傷整形外科手術(shù)患者病理性瘢痕10例,成熟瘢痕10例,同一患者多余的正常皮膚組織10例作為對(duì)照,分組實(shí)驗(yàn)。
　　 蘇木精-伊紅染色:標(biāo)本固定,石蠟包埋,以5μm厚連續(xù)切片,常規(guī)HE染色,封片。光鏡下觀察各組皮膚結(jié)構(gòu),照相。請(qǐng)病理科專家

3、根據(jù)生物學(xué)特征和病理特征鑒定是否為正常皮膚、病理性瘢痕和成熟瘢痕。
　　 免疫組織化學(xué)(SP法)染色:將標(biāo)本經(jīng)固定、脫水,石蠟包埋,5μm連續(xù)切片,按常規(guī)方法作波形蛋白、拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱα、β免疫組化。顯微鏡下觀察,照相。檢測(cè)波形蛋白、拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱα、β在各組的表達(dá)。以雙盲法進(jìn)行結(jié)果判別,波形蛋白陽(yáng)性反應(yīng)產(chǎn)物位于細(xì)胞漿,拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱα、β陽(yáng)性反應(yīng)產(chǎn)物定位于細(xì)胞核。每組切片取10個(gè)高倍視野,計(jì)算陽(yáng)性反應(yīng)物的平均光密度值,結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)

4、準(zhǔn)差表示。
　　 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析數(shù)據(jù)分析用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理,進(jìn)行單因素方差分析,并進(jìn)行兩兩比較。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:HE染色:正常皮膚表皮較薄,真皮結(jié)構(gòu)清晰,具有突向表皮的真皮乳頭,結(jié)締組織纖維較細(xì),成纖維細(xì)胞呈典型的“指紋狀”生長(zhǎng),平行排列,極性明顯。病理性瘢痕表皮角化嚴(yán)重,表皮中的基底層細(xì)胞明顯增生,細(xì)胞層次增加。真皮層較厚,大量的膠原纖維增生,排列較正常皮膚結(jié)構(gòu)粗大,表現(xiàn)為結(jié)節(jié)狀

5、或漩渦狀不規(guī)則的膠原束,其中可見(jiàn)少許膠原纖維呈片狀的玻璃樣變。膠原纖維束中彌漫分布較多的成纖維細(xì)胞及微血管。成纖維細(xì)胞胞核接近圓形或三角形,胞漿豐富,排列紊亂,極性消失,有明顯的交叉重疊現(xiàn)象。成熟瘢痕表皮與正常皮膚相似,層次清晰。真皮分層不明顯,真皮內(nèi)膠原纖維明顯多于正常皮膚,但是較病理性瘢痕纖細(xì),分布較規(guī)則,細(xì)胞成分少。
　　 波形蛋白免疫組化結(jié)果:正常皮膚內(nèi)波形蛋白陽(yáng)性細(xì)胞較少,主要分布于表皮基底層細(xì)胞基底部與真皮交界區(qū),真

6、皮乳頭及真皮乳頭層內(nèi)可見(jiàn)散在陽(yáng)性細(xì)胞,其他部位未見(jiàn)陽(yáng)性細(xì)胞。病理性瘢痕表皮內(nèi)波形蛋白陽(yáng)性細(xì)胞少見(jiàn),但是真皮乳頭及真皮內(nèi)廣泛分布有波形蛋白陽(yáng)性細(xì)胞,細(xì)胞體積較大,胞漿豐富,主要分布于小血管周圍和真皮網(wǎng)織層旋渦狀增生的瘤樣增生的中心部位。成熟瘢痕內(nèi)波形蛋白陽(yáng)性細(xì)胞在表皮基底層及真皮內(nèi)表達(dá)明顯多于正常皮膚,但是較病理性瘢痕的染色淺,細(xì)胞體積小,且排列較規(guī)則。
　　 TopoⅡα免疫組化結(jié)果:在正常皮膚和成熟瘢痕表皮基底層可見(jiàn)TopoⅡ

7、α陽(yáng)性細(xì)胞,成熟瘢痕表皮基底層表達(dá)比正常皮膚稍強(qiáng),真皮內(nèi)未見(jiàn)陽(yáng)性細(xì)胞。病理性瘢痕表皮基底層細(xì)胞內(nèi)TopoⅡα表達(dá)明顯降低,呈弱陽(yáng)性。病理性瘢痕真皮乳頭層小血管周圍可見(jiàn)陽(yáng)性表達(dá)。在網(wǎng)織層增生組織之間,部分血管周圍呈現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)。
　　 TopoⅡβ免疫組化結(jié)果:正常皮膚表皮基底細(xì)胞層、棘細(xì)胞層、顆粒細(xì)胞層均可見(jiàn)陽(yáng)性細(xì)胞,基底層著色相對(duì)較深,真皮內(nèi)未見(jiàn)陽(yáng)性細(xì)胞。在成熟瘢痕表皮基底細(xì)胞層、棘細(xì)胞層和顆粒細(xì)胞層均有陽(yáng)性細(xì)胞,數(shù)量較正常皮膚

8、增多,真皮內(nèi)未見(jiàn)陽(yáng)性染色細(xì)胞。在病理性瘢痕表皮可見(jiàn)少量陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞,棘細(xì)胞層和顆粒細(xì)胞層較基底層更明顯。真皮乳頭層未見(jiàn)陽(yáng)性細(xì)胞,真皮網(wǎng)織層內(nèi)結(jié)節(jié)狀或旋渦狀排列的膠原纖維間可見(jiàn)大量染色較深的陽(yáng)性細(xì)胞,細(xì)胞大,形態(tài)不規(guī)則。
　　 結(jié)論:
　　 波形蛋白是成纖維細(xì)胞特異性的標(biāo)志,波形蛋白免疫組化結(jié)果顯示在正常皮膚內(nèi)僅有少量表達(dá),而在成熟瘢痕和病理性瘢痕中大量表達(dá),證實(shí)成纖維細(xì)胞參與創(chuàng)傷愈合及瘢痕形成過(guò)程。
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