結(jié)核分枝桿菌DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅰ與DNA的相互作用研究.pdf

1、DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅰ(DNA topoisomeraseⅠ,EC5.99.1.2)是生物細(xì)胞存活所必須的基礎(chǔ)酶類,屬于類型Ⅰ拓?fù)洚悩?gòu)酶。它能夠使一條DNA單鏈通過(guò)另一條瞬時(shí)斷裂的DNA單鏈,隨后連接斷裂的DNA,從而實(shí)現(xiàn)DNA拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)的相互轉(zhuǎn)化,此過(guò)程不需要能量輔因子,如ATP或NAD。但是目前國(guó)內(nèi)外對(duì)拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅰ的作用機(jī)理的研究還不是很深入。因?yàn)樵撁高M(jìn)行催化反應(yīng)的第一步就是與DNA結(jié)合,所以我們從對(duì)結(jié)核分枝桿菌拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅰ(MTB To

2、poⅠ)與DNA的相互作用的研究為切入點(diǎn)展開了對(duì)MTB TopoⅠ的DNA結(jié)合機(jī)理的研究。通過(guò)一系列的實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn):MTBTopoⅠ既能夠結(jié)合雙鏈DNA,也能夠結(jié)合單鏈DNA,為一種單雙鏈結(jié)合蛋白；MTBTopoⅠ既能夠結(jié)合含有強(qiáng)拓?fù)洚悩?gòu)酶結(jié)合位點(diǎn)(STS)序列的DNA片段,也能結(jié)合不含有STS序列的DNA片段,也就是說(shuō)MTB TopoⅠ對(duì)DNA的結(jié)合沒有序列特異性。我們通過(guò)對(duì)各種條件下它與DNA的結(jié)合情況的實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn):MTB Top

3、oⅠ結(jié)合雙鏈DNA具有瞬時(shí)性,耐高溫性,且不依賴于鎂離子,比較適應(yīng)于中性偏酸的環(huán)境條件等特點(diǎn)。在此基礎(chǔ)上我們又對(duì)MTB TopoⅠ與大腸桿菌的TopoⅠ、大腸桿菌TopoⅢ與DNA的結(jié)合活性進(jìn)行了比較。結(jié)果顯示,MTB TopoⅠ較之其他兩種類型Ⅰ拓?fù)洚悩?gòu)酶蛋白有更強(qiáng)的DNA結(jié)合活性,而且用凝膠排阻電泳法檢測(cè)到MTB TopoⅠ可以與酵母tRNA結(jié)合,從而推測(cè)MTB TopoⅠ可能是一種RNA結(jié)合蛋白。
　　 本研究結(jié)論,均說(shuō)明