阿托伐他汀對兔蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷的保護作用及其機制的實驗研究.pdf

1、第一部分阿托伐他汀對兔蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期海馬、腦干神經(jīng)元保護作用的研究
　　目的：采用兔蛛網(wǎng)膜下腔出血后的動物模型，研究阿托伐他汀對兔蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期海馬及腦干神經(jīng)元是否具有保護作用。
　　方法：完全隨機將32只成年健康雄性新西蘭大白兔(2~2.5kg)分成SAH組（n=8）、對照組（n=8）、SAH+安慰劑組（n=8）及SAH+阿托伐他汀治療組（n=8）。應(yīng)用開顱枕大池一次注血法模擬蛛網(wǎng)膜下腔出血動物模型。分別于出血

2、后4h、16h、28h、40h分別灌服劑量為5mg/kg/次的阿托伐他汀，48h后處死新西蘭大白兔。留取海馬、腦干做標(biāo)本。SAH建模成功后觀察新西蘭大白兔的行為功能變化，進行神經(jīng)功能評分；分別采用TUNEL法檢測海馬、腦干神經(jīng)元的凋亡；同時采用免疫組化法測定Bcl-2、Bax因子表達的變化；
　　結(jié)果：行為學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)與對照組相比，SAH組新西蘭大白兔活動及飲食明顯減少，其平均神經(jīng)功能評分低，有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；阿托伐

3、他汀治療組神經(jīng)功能評分優(yōu)于安慰劑組，差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；凋亡細(xì)胞檢測顯示對照組中很少發(fā)現(xiàn)陽性細(xì)胞，SAH組陽性細(xì)胞明顯增多（P<0.01），同時阿托伐他汀組陽性細(xì)胞數(shù)明顯少于安慰劑組，安慰劑組與SAH組陽性細(xì)胞數(shù)無差別（P>0.05）；凋亡相關(guān)因子免疫組化檢測發(fā)現(xiàn)：SAH組與對照組比較，腦干及海馬區(qū)Bax、Bcl-2表達明顯增加（P<0.05），阿托伐他汀組較安慰劑組Bax表達下降（P<0.05），Bcl-2表達增加（P<

4、0.05）。安慰劑組較SAH組改善不顯著（P>0.05）。
　　結(jié)論：1.蛛網(wǎng)膜下腔出血后48可觀察到兔出現(xiàn)明顯神經(jīng)功能障礙并且腦干及海馬區(qū)神經(jīng)元出現(xiàn)明顯凋亡；2.阿托伐他汀可明顯抑制神經(jīng)元的凋亡，對早期腦干、海馬區(qū)神經(jīng)元具有保護作用。
　　第二部分阿托伐他汀對兔蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦水腫及AQP4表達的影響
　　目的：利用兔蛛網(wǎng)膜下腔出血動物模型模型，研究SAH早期腦水腫與AQP4表達的關(guān)系，并探討阿托伐他汀對蛛網(wǎng)膜

5、下腔出血早期腦水腫的影響及其機制。
　　方法：32只成年健康雄性新西蘭大白兔(2~2.5kg)被隨機分成SAH組（n=8）、對照組（n=8）、SAH+安慰劑組（n=8）及SAH+阿托伐他汀治療組（n=8）。應(yīng)用開顱枕大池一次注血法模擬蛛網(wǎng)膜下腔出血動物模型。分別于出血后4h、16h、28h、40h分別灌服阿托伐他汀，劑量為5mg/kg/次，48h后處死新西蘭大白兔。留取整個大腦半球做標(biāo)本。采用干濕重法測定腦組織含水量；采用West

6、ern blot法測定AQP4的表達情況以及通過尼氏染色了解神經(jīng)元凋亡情況；
　　結(jié)果：SAH后早期腦水腫明顯，SAH后48小時腦組織含水量達82.16％，同時測得AQP4的含量較高；與對照組比較腦組織含水量及AQP4的表達明顯增加（P<0.01）；阿托伐他汀治療組的含水量為80.13%，AQP4的含量較安慰劑組明顯下降（P<0.01）；而安慰劑組與對照組比較無明顯差別（P>0.05）；SAH組神經(jīng)元凋亡較對照組明顯增多而與安慰劑

7、組比較無差異，而SAH+阿托伐他汀組神經(jīng)元凋亡較安慰劑組少，有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：1.蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期即可產(chǎn)生腦水腫，且和AQP4的表達及神經(jīng)元凋亡呈正相關(guān)；2.應(yīng)用阿托伐他汀治療蛛網(wǎng)膜下腔出血可明顯降低AQP4的表達且可改善血腦屏障減輕早期腦水腫。
　　第三部分阿托伐他汀對兔蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦血管的保護作用
　　目的：利用蛛網(wǎng)膜下腔出血的動物模型，探討阿托伐他汀對蛛網(wǎng)膜下腔出血早期腦血管是

8、否具有保護作用。
　　方法：將24只成年健康雄性新西蘭大白兔(2~2.5kg)隨機分成SAH組（n=8）、對照組（n=8）及SAH+阿托伐他汀治療組（n=8）。應(yīng)用開顱枕大池一次注血法模擬蛛網(wǎng)膜下腔出血動物模型，對照組給予開顱去除顱骨但不注動脈血，SAH組開顱注入自體動脈血1ml/kg，阿托伐他汀組給予口服阿托伐他汀5mg/kg/次，分別于出血后4h、16h、28h、40h分別灌服阿托伐他汀，48h后處死新西蘭大白兔，留取基底動脈

9、、顳葉皮層、腦干等組織做標(biāo)本，免疫組化法測定測定基底動脈中vWF及TM的表達情況，RT-PCR測定血管內(nèi)皮細(xì)胞中vWF及TM的mRNA的表達，HE染色測定基底動脈血管內(nèi)徑周長與管壁厚度比值即T值（D/A）。
　　結(jié)果：RT-PCR結(jié)果顯示對照組的vWF及TM的mRNA的表達水平較弱，SAH組較對照組比較其vWF及TM的mRNA的表達明顯增加（P<0.01）；阿托伐他汀治療組vWF及TM的mRNA的表達明顯低于SAH組（P<0.01

10、）。免疫組化結(jié)果顯示對照組中vWF及TM的表達陽性率較低；與對照組相比，SAH組vWF及TM的陽性率明顯增加；阿托伐他汀治療組vWF及TM的表達陽性率低于SAH組。HE染色結(jié)果顯示SAH組較對照組比較，基底動脈內(nèi)徑周長與管壁厚度比（T值）明顯降低（P<0.01）；阿托伐他汀組T值明顯高于SAH組（P<0.01）。
　　結(jié)論：1.SAH早期即可引起腦血管痙攣以及血管內(nèi)皮細(xì)胞自我調(diào)節(jié)功能障礙；2.阿托伐他汀可以保護血管內(nèi)皮細(xì)胞，減輕血