1型多聚二磷酸腺苷核糖合成酶抑制PI3K-Akt途徑調(diào)節(jié)熱休克蛋白70的機制研究.pdf

1、目的：探討1型多聚二磷酸腺苷核糖合成酶[poly(ADP-ribose)polymerase-1，PARP-1]抑制劑對血管緊張素Ⅱ刺激培養(yǎng)的大鼠心肌細胞Akt1活性和表達的影響及機制。
　　 方法：①采用胰酶和膠原酶雙酶消化和差速貼壁法分離乳鼠心肌細胞并培養(yǎng)。用10-7mol/L AngⅡ誘導(dǎo)，觀察心肌細胞PARP-1活性以及PARP-1蛋白，Akt1蛋白及其下游靶基因Hsp70蛋白的表達情況，并觀察使用PARP-1抑制劑3A

2、B對上述基因表達的影響。②采用免疫共沉淀的方法探討PARP-1影響培養(yǎng)的大鼠心肌細胞Akt1活性和表達可能的機制。
　　 結(jié)果：血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)誘導(dǎo)乳鼠心肌細胞內(nèi)PARP-1蛋白，Akt1蛋白，Hsp70蛋白表達水平顯著增加；使用PARP-1抑制劑3AB后，PARP-1活性以及蛋白表達水平降低，而Akt1蛋白，Hsp70蛋白表達水平進一步增加；使用PI3K抑制劑LY294002以及纈沙坦后，PARP-1蛋白，Akt1蛋白

3、，Hsp70蛋白表達水平均顯著降低。采用免疫共沉淀的方法顯示PARP-1蛋白能和Akt1蛋白結(jié)合，Akt1蛋白能被PARP-1蛋白多聚核糖化修飾，同時PARP-1蛋白能被磷酸化修飾。
　　 結(jié)論：AngⅡ誘導(dǎo)乳鼠心肌細胞內(nèi)PARP-1蛋白表達和活性均增高，通過激活PI3K/Akt通路，使Akt1蛋白及其下游靶基因Hsp70蛋白表達增加；抑制PARP-1可以增強Akt1的表達繼而增加Hsp70的表達。PARP-1蛋白調(diào)節(jié)Akt1蛋