鈦離子對(duì)T細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度影響的研究.pdf

1、目的:觀察鈦離子對(duì)T細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度和分布變化，三磷酸肌醇（IP3）的表達(dá)和磷脂酶Cγ1(PLCγ1)表達(dá)及其磷酸化水平的影響，探討鈦離子對(duì)T細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度及鈣通道上IP3、PLCγ1蛋白的影響。
　　方法:1、培養(yǎng)Jukat T細(xì)胞，MTT比色法檢測(cè)鈦離子使T細(xì)胞增殖率為50％、95％的濃度，并選擇最大增殖率的濃度和中間的離子濃度，作為實(shí)驗(yàn)組濃度。
　　2、將Jukat T細(xì)胞用植物血凝素（PHA）預(yù)先活化或不活化，然后

2、與不同濃度的鈦離子共培養(yǎng)，激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)T細(xì)胞在24小時(shí)胞內(nèi)鈣離子含量和分布變化表達(dá)，酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定(ELLSA)檢測(cè)24小時(shí)IP3蛋白表達(dá)量，蛋白免疫印跡法(WB)檢測(cè)24小時(shí)細(xì)胞內(nèi)PLCγ1蛋白表達(dá)水平及其磷酸化水平。
　　結(jié)果:1、鈦離子濃度低于100μM/L時(shí)，可活化增殖T細(xì)胞，隨濃度增加，增殖率上升;濃度在100-200μM/L之間時(shí)，增殖率下降，濃度大于200μM/L時(shí)，細(xì)胞呈抑制增殖。細(xì)胞的增殖率為50％、

3、95％的濃度分別是5μM/L、10μM/L，最大增殖率時(shí)濃度為100μM/L，中間濃度為50μM/L。
　　2、濃度為5μM/L，10μM/L，50μM/L，100μM/L的鈦離子，在含Ca2+的細(xì)胞外液中，可使活化和未活化的細(xì)胞內(nèi)的Cd+濃度上升，且活化后的細(xì)胞內(nèi)的Ca2+濃度上升更顯著，與對(duì)照組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。在無Ca2+的細(xì)胞外液中，活化和未活化的細(xì)胞內(nèi)的Ca2+濃度未見明顯變化，與對(duì)照組比較，差異

4、均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　3、濃度為5μM/L，10μM/L，50μM/L，100μM/L的鈦離子，作用活化的T細(xì)胞24小時(shí)，細(xì)胞內(nèi)IP3表達(dá)上調(diào)，與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）。不同濃度之間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）。未活化的細(xì)胞，鈦離子作用后，細(xì)胞內(nèi)IP3表達(dá)下降，與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）。不同濃度之間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　4、濃度為5

5、μM/L，10μM/L，50μM/L，100μM/L的鈦離子，作用活化的T細(xì)胞24小時(shí)，細(xì)胞內(nèi)PLCγ1的磷酸化水平上升，與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);不同濃度之間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。未活化的細(xì)胞，鈦離子作用后，PLCγ1的磷酸化水平下降，與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）。
　　結(jié)論:1、鈦離子濃度低于100μM/L時(shí)，可活化增殖T細(xì)胞。
　　2、鈦離子可使活化的T細(xì)胞內(nèi)的