黃芩苷對(duì)大鼠氣管平滑肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的影響.pdf

1、背景:
　　黃芩苷是從黃芩的干燥根中提取分離出來(lái)的一種黃酮類(lèi)化合物，具有多種藥理作用。資料顯示，黃芩苷能舒張大鼠胸主動(dòng)脈平滑肌和豚鼠的離體腸管平滑肌，其機(jī)制與阻斷平滑肌細(xì)胞膜上的電壓依賴型鈣通道和受體依賴型鈣通道有關(guān)。也有文獻(xiàn)報(bào)道黃芩苷對(duì)治療哮喘發(fā)作有一定的療效，具體的機(jī)制目前尚不不清楚。本實(shí)驗(yàn)室前期的研究結(jié)果證明黃芩苷通過(guò)調(diào)節(jié)cGMP的信號(hào)途徑，進(jìn)而舒張大鼠離體氣管平滑肌。
　　目的:
　　本研究通過(guò)探討黃芩苷對(duì)大鼠

2、氣管平滑肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的影響及相關(guān)機(jī)制，對(duì)黃芩苷的藥理作用機(jī)制作進(jìn)一步補(bǔ)充，為其臨床應(yīng)用提供相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　大鼠氣管平滑肌細(xì)胞的原代培養(yǎng)，隨機(jī)分為對(duì)照組、黃芩苷組、亞甲基蘭(MB)+黃芩苷組、左旋氮氨酸精氨酸甲酯(L-NAME)+黃芩苷組以及細(xì)胞外液無(wú)鈣組（對(duì)照組與黃芩苷組），采用鈣離子熒光探針Fluo-3/AM標(biāo)記培養(yǎng)的平滑肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子，在激光共聚焦顯微鏡下連續(xù)掃描;健康的成年SD大鼠20只，（雌雄

3、不拘）隨機(jī)分為對(duì)照組、黃芩苷組。頸椎脫臼法處死后迅速分離氣管，黃芩苷組用終濃度8×10-4M黃芩苷的Krebs液37℃液孵育40min，對(duì)照組加等同黃芩苷量的PBS液孵育。采用免疫組化法測(cè)定誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)的表達(dá)，按照一氧化氮合酶檢測(cè)試劑盒的方法測(cè)NOS的活性。所有數(shù)據(jù)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。
　　結(jié)果:
　　1.黃芩苷組細(xì)胞內(nèi)Ca2+熒光強(qiáng)度值在5min和10min后分別是2492.791±5.7

4、30和1689.097±5.202(n=10)與對(duì)照組細(xì)胞內(nèi)Ca2+熒光強(qiáng)度值5min和10min后3839.368±6.035和3860.163±7.607(n=10)相比明顯降低(P＜0.01)，說(shuō)明黃芩苷明顯的降低了細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度;MB+黃芩苷組細(xì)胞內(nèi)Ca2+熒光強(qiáng)度值在5min和10min后分別是3009.596±5.296和3032.298±5.192(n=10)與黃芩昔組相比細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度升高說(shuō)明MB阻斷了黃芩苷促進(jìn)

5、鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶(GC)減少細(xì)胞內(nèi)Ca2+的作用(P＜0.01); L-NAME+黃芩苷組細(xì)胞內(nèi)Ca2+熒光強(qiáng)度值在5min和10min后分別是3113.462±6.028和3130.269±6.114(n=10)與黃芩苷組相比細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度升高，說(shuō)明L-NAME抑制了黃芩苷促進(jìn)NO合成減少細(xì)胞內(nèi)Ca2+的作用（P＜0.01）。
　　2.細(xì)胞外液無(wú)鈣時(shí)，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，黃芩苷組與對(duì)照組相比P＞0.05，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表明黃芩