人視網(wǎng)膜色素上皮細胞吞噬過程中細胞內(nèi)鈣離子濃度的變化.pdf

1、目的:視網(wǎng)膜色素上皮(RPE)細胞具有復雜的結(jié)構(gòu)和特殊的生理功能.它的吞噬功能對維持正常的視覺至關(guān)重要.該功能障礙時引起視細胞外節(jié)膜盤的堆積而導致嚴重的視網(wǎng)膜變性.國內(nèi)外學者已經(jīng)證實視網(wǎng)膜變性性疾病RPE細胞特異性吞噬功能障礙而非特異性吞噬功能正常,但其機理未得到闡明,進一步探討吞噬功能及其機制,將對這類疾病的預防和治療帶來希望.目前雖已知RPE細胞的特異性吞噬功能涉及腺體-受體相互作用,啟動跨膜信號傳導系統(tǒng);但是關(guān)于跨膜信號傳導系統(tǒng)在

2、RPE細胞的特異性吞噬過程中所起的作用仍不十分清楚.為此我們選擇信號傳導通路中的一個信使分子鈣離子作為研究對象.通過采取體外培養(yǎng)人視網(wǎng)膜色素上皮細胞(human retinal pigment epithelium,HRPE),動態(tài)檢測人視網(wǎng)膜色素上皮細胞特異性及非特異性吞噬過程中Ca<'2+>濃度變化,明確Ca<'2+>在HRPE的吞噬功能中所起的作用.材料與方法:1.材料來源:取自中國醫(yī)科大學附屬一院眼科角膜術(shù)后的正常眼球,眼球供體

3、年齡限制在24-36歲.2.RPE細胞的培養(yǎng)及標記.采用胰蛋白酶消化法.3.ROS的提取和人RPE細胞色素顆粒的制備.用細胞培養(yǎng)液調(diào)整濃度至10<'7>ml<'-1>.4.RPE細胞吞噬模型的制備.把1×10<'7>ml<'-1>視桿細胞外節(jié)膜盤(rod outer segments,ROS)及色素顆粒分別加入到37℃孵育培養(yǎng)的正常HRPE細胞,在孵育的不同時間(5min-24h)終止吞噬反應.用雙重熒光標記法檢測HRPE細胞吞噬動力學