人視網(wǎng)膜色素上皮細胞吞噬動力學及吞噬過程中cAMP濃度的變化.pdf_第1頁
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1、中國醫(yī)科大學碩士學位論文人視網(wǎng)膜色素上皮細胞吞噬動力學及吞噬過程中cAMP濃度的變化姓名：孫昱昭申請學位級別：碩士專業(yè)：眼科學指導教師：洪晶20020601室溫下，于暗處用終濃度為10ug／ml的FITC液孵育以蔗糖密度梯度法提取的ROS1小時，然后以細胞培養(yǎng)液調(diào)整濃度為1107rnl～。4乳膠微球的制備以細胞培養(yǎng)液調(diào)整濃度至lX107ml～。5吞噬動力學觀察向每個培養(yǎng)孔(6孔板)中加入1107ml。的FITC—ROS或LB懸液2rrd

2、，進行孵育。分別在孵育5min、15rain、30min、15h、3h、6h、12h、18h、24h、36h、48h的時候，將孵育液吸出，以4。C的無血清DMEM沖洗二次，以終止吞噬。采用雙重熒光標記法，于上述相應的實驗時間點，在熒光顯微鏡下以非選擇性濾光片動態(tài)觀察HRPE細胞的吞噬過程。6掃描及透射電鏡經(jīng)與ROS或LB孵育6h后，加入25％的戊二醛固定，備電鏡觀察。7細胞內(nèi)cAMP濃度的檢測實驗組每個培養(yǎng)孔(24孔板)中加入1107r

3、nl“的ROS或LB懸液lml，對照組加入培養(yǎng)液lml／孑L進行孵育，終止吞噬的時間及方法同上。向終止反應后的HRPE細胞中加入無血清DMEM液(PH74)200ul／孑l，立即放人沸水中煮沸3min。從每個孔中取上清液100ul備125I—cAMP放射免疫檢測。8統(tǒng)計學分析結果每個實驗點至少重復3次，計算均值標準差(叉s)。用Student’st檢驗，比較實驗組與對照組數(shù)值，P005為統(tǒng)計學上有明顯差異的標準。結果一、HRPE細胞吞噬

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