不同刺激物對大鼠吞噬細胞吞噬能力及[Ca2+]i濃度影響.pdf

1、目的：巨噬細胞和中性粒細胞的反應(yīng)性對炎癥過程至關(guān)重要。本研究觀察N-甲酰-甲硫氨酰-亮氨酰苯丙氨酸（N-formyl-methionyl-leucy1-phenylalanine，fMLP）、豆蔻酰佛波醇乙酯（Phorbol-12-myristate-13-acetate，PMA）及白三烯B4(Leukotriene B4，LTB4)誘導大鼠腹腔巨噬細胞和中性粒細胞吞噬能力的變化，并以細胞內(nèi)游離鈣離子濃度（[Ca2+]i）為指標，測定了

2、靜息狀態(tài)下腹腔巨噬細胞和中性粒細胞內(nèi)[Ca2+]i水平及其對fMLP、PMA、LTB4的反應(yīng)性。
　　方法：大鼠腹腔內(nèi)注射5％明膠生理鹽，16h后脫頸處死，灌洗腹腔并收取腹腔滲透液，洗滌后，通過密度梯度離心法分離巨噬細胞及中性粒細胞。對分離后得到的巨噬細胞及中性粒細胞進行以下兩方面的研究：1.使用熒光顯微鏡和相差顯微鏡對中性粒細胞和巨噬細胞對熒光微球和酵母多糖的吞噬能力的檢測。2.將分離的吞噬細胞用Fura-2/AM（終濃度為5μ

3、mol/l）負載1h，洗滌去除未進入細胞內(nèi)的Fura-2/AM，采用細胞內(nèi)離子測定儀（雙波長熒光分光光度計），在激發(fā)波長為340nm和380nm，發(fā)射波長為510nm條件下測定細胞內(nèi)[Ca2+]i的動態(tài)變化。
　　結(jié)果：1.靜息狀態(tài)下，巨噬細胞對熒光微球的吞噬能力顯著大于中性粒細胞；經(jīng)fMLP、PMA、LTB4誘導后，巨噬細胞及中性粒細胞對熒光微球的吞噬能力增強。2.靜息狀態(tài)下，巨噬細胞內(nèi)[Ca2+]i濃度高于中性粒細胞；不同濃度

4、fMLP、PMA及LTB4作用下，[Ca2+]i變化都具有濃度依賴性；經(jīng)LTB4誘導，[Ca2+]i呈一過性增高，持續(xù)時間較短，約大概1min后恢復到靜息狀態(tài)的濃度；經(jīng)fMLP誘導后，[Ca2+]i亦呈一過性增高，但持續(xù)時間較長，其[Ca2+]i濃度緩慢下降，具有時間和濃度依賴性；在高濃度的fMLP刺激下，約10min后恢復到靜息狀態(tài)的濃度；經(jīng)PMA誘導后，[Ca2+]i增高幅度最大，持續(xù)時間最長，觀察45min后也無下降趨勢。