不同刺激物對(duì)大鼠吞噬細(xì)胞吞噬能力及[Ca2+]i濃度影響.pdf

1、目的：巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的反應(yīng)性對(duì)炎癥過(guò)程至關(guān)重要。本研究觀察N-甲酰-甲硫氨酰-亮氨酰苯丙氨酸（N-formyl-methionyl-leucy1-phenylalanine，fMLP）、豆蔻酰佛波醇乙酯（Phorbol-12-myristate-13-acetate，PMA）及白三烯B4(Leukotriene B4，LTB4)誘導(dǎo)大鼠腹腔巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞吞噬能力的變化，并以細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度（[Ca2+]i）為指標(biāo)，測(cè)定了

2、靜息狀態(tài)下腹腔巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞內(nèi)[Ca2+]i水平及其對(duì)fMLP、PMA、LTB4的反應(yīng)性。
　　方法：大鼠腹腔內(nèi)注射5％明膠生理鹽，16h后脫頸處死，灌洗腹腔并收取腹腔滲透液，洗滌后，通過(guò)密度梯度離心法分離巨噬細(xì)胞及中性粒細(xì)胞。對(duì)分離后得到的巨噬細(xì)胞及中性粒細(xì)胞進(jìn)行以下兩方面的研究：1.使用熒光顯微鏡和相差顯微鏡對(duì)中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞對(duì)熒光微球和酵母多糖的吞噬能力的檢測(cè)。2.將分離的吞噬細(xì)胞用Fura-2/AM（終濃度為5μ

3、mol/l）負(fù)載1h，洗滌去除未進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的Fura-2/AM，采用細(xì)胞內(nèi)離子測(cè)定儀（雙波長(zhǎng)熒光分光光度計(jì)），在激發(fā)波長(zhǎng)為340nm和380nm，發(fā)射波長(zhǎng)為510nm條件下測(cè)定細(xì)胞內(nèi)[Ca2+]i的動(dòng)態(tài)變化。
　　結(jié)果：1.靜息狀態(tài)下，巨噬細(xì)胞對(duì)熒光微球的吞噬能力顯著大于中性粒細(xì)胞；經(jīng)fMLP、PMA、LTB4誘導(dǎo)后，巨噬細(xì)胞及中性粒細(xì)胞對(duì)熒光微球的吞噬能力增強(qiáng)。2.靜息狀態(tài)下，巨噬細(xì)胞內(nèi)[Ca2+]i濃度高于中性粒細(xì)胞；不同濃度

4、fMLP、PMA及LTB4作用下，[Ca2+]i變化都具有濃度依賴性；經(jīng)LTB4誘導(dǎo)，[Ca2+]i呈一過(guò)性增高，持續(xù)時(shí)間較短，約大概1min后恢復(fù)到靜息狀態(tài)的濃度；經(jīng)fMLP誘導(dǎo)后，[Ca2+]i亦呈一過(guò)性增高，但持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)，其[Ca2+]i濃度緩慢下降，具有時(shí)間和濃度依賴性；在高濃度的fMLP刺激下，約10min后恢復(fù)到靜息狀態(tài)的濃度；經(jīng)PMA誘導(dǎo)后，[Ca2+]i增高幅度最大，持續(xù)時(shí)間最長(zhǎng)，觀察45min后也無(wú)下降趨勢(shì)。