長(zhǎng)期給予齊墩果酸對(duì)小鼠的肝毒性研究.pdf

1、目的：研究長(zhǎng)期給予小鼠不同劑量的齊墩果酸，其體內(nèi)藥物濃度的變化與肝毒性的關(guān)系及對(duì)Nrf2等信號(hào)通路基因的影響。
　　方法：將40只健康SPF級(jí)雄性昆明小鼠隨機(jī)分為4組：正常對(duì)照組，低劑量組（45.7 mg/kg），中劑量組（91 mg/kg），高劑量組（137 mg/kg），每組10只，連續(xù)給藥90天，末次給藥后1小時(shí)，收集動(dòng)物的血液和肝臟，測(cè)定血漿ALT、AKP活性及TBIL含量；HE染色、Masson染色、天狼星紅染色觀察齊墩

2、果酸對(duì)肝臟形態(tài)學(xué)的影響；LC-MS法檢測(cè)血漿和肝臟中齊墩果酸的濃度；RT-PCR法檢測(cè)齊墩果酸對(duì)小鼠肝臟TGFβ/Smad通路、Hedgehog通路、膽汁酸合成通路以及Nrf2通路基因mRNA表達(dá)的影響；Western-blot法檢測(cè)肝細(xì)胞核內(nèi)Nrf2蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：1.給予小鼠小劑量齊墩果酸90天，與正常對(duì)照組比較，小鼠體重?zé)o明顯變化，肝重指數(shù)增加，丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、堿性磷酸酶（AKP）活性升高，但總膽紅素（TBIL

3、）含量不變，在肝臟HE染色中，正常對(duì)照組肝小葉結(jié)構(gòu)清晰完好，齊墩果酸低劑量組出現(xiàn)肝肝細(xì)胞輕微腫大，中劑量組出現(xiàn)肝細(xì)胞點(diǎn)狀壞死，高劑量肝細(xì)胞點(diǎn)狀壞死面積增多；Masson染色觀察到正常對(duì)照組匯管區(qū)周圍被染成藍(lán)色的膠原纖維含量正常，低劑量組匯管區(qū)，被染成藍(lán)色的面積擴(kuò)大，中劑量組匯管區(qū)內(nèi)成纖維細(xì)胞增生，膠原纖維間隔形成，高劑量組匯管區(qū)內(nèi)成纖維細(xì)胞大量增生，成纖維隔，纖維間隔伴小葉結(jié)構(gòu)紊亂；天狼星紅染色觀察到正常對(duì)照組匯管區(qū)周圍被染成紅色的纖維

4、細(xì)胞含量正常，隨給藥劑量的增加，被染成紅色的纖維細(xì)胞面積增大，高劑量時(shí)可觀察到肝細(xì)胞出現(xiàn)大面積纖維化。
　　2. LC-MS法檢測(cè)到齊墩果酸在血漿中的藥物濃度隨給藥劑量的增加而增加，而肝臟中的齊墩果酸濃度基本相同，且與給藥劑量無(wú)關(guān)。
　　3.長(zhǎng)期給予齊墩果酸對(duì)小鼠 TGFβ/Smad通路中Smad7 mRNA的表達(dá)具有明顯的抑制作用（P＜0.05）；低劑量和中劑量可誘導(dǎo) Smad3的表達(dá)（P＜0.05）；抑制 Hedegho

5、g通路中的Shh、Smo mRNA基因的表達(dá)（P＜0.05）；可抑制膽汁酸合成通路中Cyp27a1和 SHP的mRNA表達(dá)（P＜0.05），低劑量對(duì) Nrf2通路中 Nrf2、GCLC、NQO1、GST、HO-1、Mrp2以及 Mrp3的mRNA表達(dá)具有誘導(dǎo)作用（P＜0.05）。
　　4. Western-blot法檢測(cè)肝細(xì)胞核內(nèi) Nrf2蛋白在高劑量組中表達(dá)明顯升高（P＜0.05）。結(jié)論：長(zhǎng)期給予小鼠小劑量齊墩果酸會(huì)導(dǎo)致肝纖維化