人類生精相關基因DNAJB13在精子運動中的功能和機制研究.pdf

1、男方因素導致不孕不育所占比例約為50％，其中約19％與精子活力低下（又稱弱精子癥）有直接密切關系。研究表明弱精癥的病因多樣，特發(fā)性弱精癥是其中數(shù)量較多、病情較重、病因不明的一類。遺傳因素是導致特發(fā)性弱精癥發(fā)生的一個主要因素。目前臨床對于這類患者常采用人工輔助生殖技術治療，這樣就不可避免的導致異常基因發(fā)生垂直傳遞，到了下一代又會面臨不育的難題。由此可見，要從根本上治療特發(fā)性弱精癥的問題，就必須了解精子發(fā)生的分子機制。
　　前期的實驗

2、研究中我們定位及克隆了人類生精相關基因DNAJB13及其小鼠同源新基因Dnajb13。RT-PCR顯示DNAJB13在人睪丸中有高表達，在人成熟精子中亦有表達，原位雜交實驗結果顯示DNAJB13表達于各級生精細胞。
　　目的和方法:DNAJB13在人類睪丸組織中有高表達，但目前對DNAJB13定位、功能及作用的分子機制均尚不清楚。本研究擬通過Western Blot、免疫熒光共定位、免疫電鏡研究DNAJB13蛋白在人成熟精子中的表

3、達及定位;通過基因突變篩查研究DNAJB13基因與人類特發(fā)性弱精癥的相關性;利用免疫共沉淀技術聯(lián)合液相質譜分析研究DNAJB13在成熟精子運動過程中的相互作用蛋白。
　　結果:①Western blot結果顯示DNAJB13蛋白在成年人成熟精子中有表達;免疫熒光共定位將DNAJB13蛋白進一步定位在人成熟精子尾部;免疫電鏡實驗則將其更精細的定位在人成熟精子鞭毛中段放射輻、外側微管、外周致密纖維以及線粒體。②國際上首次在特發(fā)性弱精癥

4、病人中發(fā)現(xiàn)DNAJB13基因第2外顯子存在2個錯義突變(c.857T＞C、c.912T＞C)，另外檢測到第2外顯子3個已知多態(tài)位點(rs199547235，rs10793069，rs10793068);第3外顯子2個已知多肽位點(rs65326，rs145909750)，第8外顯子3個已知多態(tài)位點(rs2306820，rs2306819，rs72982975)。③篩查到包括HKI和LDHC在內的一批蛋白，在人成熟精子中可能與DNAJB1