2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:機械通氣是呼吸衰竭患者不可缺少的生命支持手段,也是手術患者常用的呼吸管理方法,而機械通氣性肺損傷(ventilator inducedlung injury,VILI)是機械通氣的常見并發(fā)癥,影響機械通氣的治療效果。盡管肺保護通氣策略(小潮氣量機械通氣)能減少VILI的發(fā)生,但為了保證足夠的氣體交換潮氣量的減少常常受到限制,因此尋求VILI有效的藥物預防仍有重要意義。VILI的主要病理基礎是肺泡炎癥及肺泡毛細血管通透性增加,但具體

2、機制還不清楚。因此,本研究擬觀察SD大鼠VILI過程中肺泡炎癥反應、整合素αVβ3、核轉錄因子(nuclearfactor kappa B,NF-κB)的活性,以及人工合成RGDS肽(非特異性整合素受體阻斷劑)對機械通氣導致的aVβ3、NF-κB活性變化的影響,以期闡明整合素αVβ3介導的NF-κB通路在肺泡炎癥中的作用。同時,建立人肺微血管內皮細胞(human pulmonary microvascular,HPMVEC)的機械牽拉模

3、型,觀察機械牽拉對HPMVEC單層通透性及整合素αVβ3活性的影響,并分析兩者的關系,以期闡明整合素αVβ3在肺泡毛細血管通透性中的作用。從而最終明確整合素αVβ3在VILI中的作用及相關機制,為VILI的防治尋求新的靶點。
   方法:動物實驗:21只雄性SD(Sprague Dawley)成年大鼠隨機分為3組(n=7):對照組(Control組),大潮氣量機械通氣組(HVT組);RGDS肽預處理組(HVT+RGDS組)。各組

4、大鼠麻醉后氣管切開插管,Control組大鼠自主呼吸4 h;HVT組大鼠行機械通氣,潮氣量35 ml/kg,呼吸頻率50次/min;HVT+RGDS組在機械通氣前30 min給予整合素受體阻斷劑RGDS肽5 mg/kg腹腔注射,機械通氣參數(shù)設定同HVT組。機械通氣4 h后放血處死大鼠,收集支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolarlavage fluid,BALF)和肺組織。BALF經(jīng)離心分別收集上清和沉淀,用酶聯(lián)免疫吸附實驗(e

5、nzyme-linked immunosorbent assays,ELISA)檢測上清中腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)、白細胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的濃度,用BAC(bicinchoninic acid)蛋白檢測試劑盒檢測上清中總蛋白的濃度;BALF沉淀用于有核細胞計數(shù),并通過細胞涂片的瑞氏染色對有核細胞進行分類。左肺組織行蘇木精-伊紅(hematoxyl

6、in-eosin,HE)染色觀察肺組織病理變化;右肺組織提取總蛋白并用蛋白質免疫印跡(Western Blot)方法測定整合素αVβ3、NF-κB抑制蛋白(I-κB)的表達以及其磷酸化水平。
   細胞實驗:購買HPMVEC細胞株進行培養(yǎng)傳代,4~8代細胞用于實驗。實驗分為3組:對照組(Control組);機械牽拉組(Stretch組);ML9預處理組(Stretch+ML9組)。Control組細胞靜態(tài)培養(yǎng)在培養(yǎng)箱內,不給予機

7、械牽拉;Stretch組細胞給予機械牽拉刺激2 h;Stretch+ML9組細胞于機械牽拉前給予肌球蛋白輕鏈激酶抑制劑ML9預處理(50μM,2 h)。用磁扭力刺激(magnetic twisting stimulation,MTS)對單層內皮細胞實施機械牽拉。用Transwell模型及異硫氰酸熒光素標記的右旋糖苷(fluorescrin isothiocyanate marked dextran,F(xiàn)ITC-dextran)溶液檢測單層

8、細胞通透性,右旋糖苷通過單層內皮細胞的多少代表單層細胞通透性,用光密度(optical density,OD)表示;用磁扭力細胞儀(magnetic twisting cytometry,MTC)檢測細胞間拉力;用免疫熒光染色檢測整合素αVβ3和肌動蛋白的分布;用Western Blot方法檢測整合素αVβ3的表達。
   計量資料用均數(shù)±標準差表示。采用SPSS12.0統(tǒng)計軟件進行方差分析(ANOVA),P值小于0.05為差異

9、有顯著性。
   結果:
   動物實驗:(1)Control組大鼠無明顯的病理改變,而HVT組肺組織病理變化明顯,包括炎癥細胞浸潤、肺泡水腫以及肺泡結構破壞,而HVT+RGDS組的肺組織病理變化較HVT組明顯減輕;(2)與Control組比較,HVT組支氣管肺泡灌洗液中多核細胞、單核細胞數(shù)量和總蛋白濃度明顯增高;與HVT組比較,HVT+RGDS組支氣管肺泡灌洗液中多核細胞、單核細胞及總蛋白明顯減少(P<0.05);(3

10、)與Control組比較,HVT組支氣管肺泡灌洗液中IL-6,TNF-α濃度明顯增加;與HVT組比較,HVT+RGDS組支氣管肺泡灌洗液中IL-6,TNF-α濃度明顯減少(P<0.05);(4)與Control組比較,HVT組肺組織整合素αVβ3、I-κB磷酸化明顯增加;與HVT組比較,HVT+RGDS組肺組織整合素αVβ3、I-κB磷酸化明顯減少(P<0.05)。
   細胞實驗:(1)與Control組比較,Stretch組

11、的通透性明顯增加(P<0.05),而Stretch+ML9組通透性無明顯變化;(2)Control組細胞肌動蛋白主要分布在細胞周邊,而Stretch組細胞漿內可見明顯的應力纖維形成,Stretch+ML9組肌動蛋白的分布與Control組相似;(3)Control組細胞整合素αVβ3均勻分布在細胞表面;而Stretch組細胞的整合素αVβ3明顯簇積;Stretch+ML9組細胞整合素αVβ3的分布與Control組相似;(4)與Cont

12、rol組比較,Stretch組細胞間拉力明顯增加(P<0.05),而Stretch+ML9組無明顯改變。
   結論:
   (1)整合素αVβ3活化參與VILI的炎癥反應及毛細血管通透性增加;
   (2)整合素αVβ3介導的NF-κB活化是VILI炎癥反應的機制之一;
   (3)整合素αVβ3簇積及應力纖維形成導致的細胞間拉力增加是VILI毛細血管通透性增加的可能機制;
   (4)抑制整合

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