未成熟睪丸組織體外生殖細(xì)胞發(fā)育的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：建立睪丸組織體外培養(yǎng)模型，比較胎牛血清(FBS)和血清替代物-KnockoutTMSR(KSR)對(duì)睪丸組織生長(zhǎng)發(fā)育的影響，觀察SD大鼠和人未成熟睪丸組織在體外培養(yǎng)條件下生殖細(xì)胞發(fā)育情況。
　　方法：
　?、賁D大鼠未成熟睪丸組織分別采用FBS和KSR連續(xù)培養(yǎng)5周，觀測(cè)培養(yǎng)睪丸組織大體面積，蘇木素-伊紅（HE）染色觀察睪丸組織學(xué)形態(tài)及生殖細(xì)胞發(fā)育，并測(cè)量曲細(xì)精管直徑。TUNEL凋亡實(shí)驗(yàn)觀察培養(yǎng)5周睪丸組織中的凋亡細(xì)胞，R

2、T-PCR檢測(cè)精子發(fā)生不同階段的標(biāo)記基因Kit、Sycp3、Crisp1。
　　②取睪丸腫瘤術(shù)中的瘤旁睪丸組織進(jìn)行體外培養(yǎng)，分別培養(yǎng)4w-17w，蘇木素-伊紅(HE)染色觀察培養(yǎng)睪丸組織的組織學(xué)結(jié)構(gòu)，測(cè)量曲細(xì)精管橫截面積和直徑，RT-PCR檢測(cè)Piwil2基因在培養(yǎng)組織中的表達(dá)，免疫組化檢測(cè)Piwil2蛋白在生殖細(xì)胞中的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　①KSR組睪丸組織體外持續(xù)生長(zhǎng)，曲細(xì)精管逐漸增大，培養(yǎng)5周觀察到精原細(xì)胞、初

3、級(jí)精母細(xì)胞、次級(jí)精母細(xì)胞、圓形精子細(xì)胞， RT-PCR檢測(cè)到Kit、Sycp3、Crisp1的表達(dá)。FBS組睪丸組織隨著培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)逐漸萎縮，培養(yǎng)5周曲細(xì)精管中出現(xiàn)明顯壞死，培養(yǎng)睪丸組織中Sycp3、Crisp1表達(dá)不穩(wěn)定。
　?、谌瞬G丸組織培養(yǎng)初期(4w)曲細(xì)精管橫截面積和直徑逐漸增大，培養(yǎng)后期有減小趨勢(shì)。培養(yǎng)8w后曲細(xì)精管中觀察到類初級(jí)精母細(xì)胞，Piwil2免疫組化染色提示生殖細(xì)胞具有自我更新分化能力。
　　結(jié)論：