苦碟子注射液引起藥物不良反應(yīng)的發(fā)生機(jī)制及其與不同制劑步驟和給藥劑量的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：通過(guò)對(duì)近十年內(nèi)苦碟子注射液引起ADR的文獻(xiàn)分析，明確苦碟子引起ADR的主要臨床癥狀和可能的作用機(jī)理。通過(guò)對(duì)不同種系大鼠、小鼠及豚鼠對(duì)常規(guī)劑量苦碟子注射液給藥后的臨床反應(yīng)的觀察，篩選一種適于進(jìn)行苦碟子注射液引起ADR機(jī)制研究的動(dòng)物模型。對(duì)不同制劑階段和不同濃度的苦碟子注射液引起豚鼠主動(dòng)全身過(guò)敏反應(yīng)和SPF級(jí)C57BL/6小鼠被動(dòng)皮膚過(guò)敏反應(yīng)進(jìn)行觀察。發(fā)現(xiàn)苦碟子注射液導(dǎo)致ADR與制劑工藝、藥物濃度等之間的相關(guān)性。
　　方法：首先

2、，檢索近十年來(lái)在國(guó)內(nèi)獲得公開(kāi)發(fā)表并被中國(guó)學(xué)術(shù)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù)、重慶維普中文科技期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù)、萬(wàn)方數(shù)據(jù)庫(kù)中任意數(shù)據(jù)庫(kù)收錄的有關(guān)苦碟子注射液引起ADR的臨床報(bào)道或基礎(chǔ)研究。將所得資料通過(guò)循證手段，借鑒cochrane手冊(cè)中對(duì)文獻(xiàn)的分析方案。將文獻(xiàn)中包含的有關(guān)不良反應(yīng)事件的臨床癥狀和可能機(jī)理進(jìn)行匯總分析。最終判斷出苦碟子注射液引起的ADR最常見(jiàn)的臨床癥狀和最可能的作用機(jī)制。
　　其次選取SPF級(jí)SD大鼠、昆明種（KM）小鼠、C57BL/

3、6小鼠及普通級(jí)英國(guó)種遠(yuǎn)交系豚鼠分為陽(yáng)性對(duì)照組、陰性對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)藥物組。分別給與卵白蛋白、生理鹽水和實(shí)驗(yàn)藥物進(jìn)行致敏，致敏方法為隔日腹腔注射各組藥物4次。致敏后兩周單次激發(fā)動(dòng)物，激發(fā)方式為豚鼠采用足趾靜脈推注給藥，大鼠和小鼠采用尾靜脈推注給藥的方式，分別給與致敏藥物2倍劑量藥物進(jìn)行激發(fā)。通過(guò)觀察動(dòng)物飼養(yǎng)過(guò)程中的存活率和動(dòng)物激發(fā)后半小時(shí)內(nèi)的過(guò)敏癥狀表現(xiàn)評(píng)分，獲得一種或兩種適合進(jìn)行過(guò)敏觀察的動(dòng)物模型。用以進(jìn)行主動(dòng)全身過(guò)敏實(shí)驗(yàn)和被動(dòng)皮膚過(guò)敏實(shí)驗(yàn)

4、。選取英國(guó)種遠(yuǎn)交系豚鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，根據(jù)給藥類別及劑量分為10組，分別給予動(dòng)物篩選實(shí)驗(yàn)相同方式進(jìn)行致敏和激發(fā)，激發(fā)半小時(shí)后采用股動(dòng)脈采血法采集豚鼠血液，斷頭法處死后采集豚鼠肺部和背部皮膚組織。將血液分離血清后進(jìn)行ELISA檢驗(yàn)，測(cè)定豚鼠血清內(nèi)總IgE、IL-2、IL-4、LTC4、PGD2及TNF-α表達(dá)情況，并對(duì)肺部和皮膚組織進(jìn)行病理學(xué)檢查。選取SPF級(jí)C57BL/6小鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，根據(jù)給藥類別及劑量分為10組。其中每組選取4只小鼠作為

5、抗血清制備組，分別隔日采用腹腔注射方法給與不同藥物4次進(jìn)行致敏。致敏后兩周處死動(dòng)物。眼球摘除取血法取小鼠血液分離血清。將抗血清按照組別注入實(shí)驗(yàn)動(dòng)物組各組動(dòng)物背部。48小時(shí)后，采用尾靜脈推注混有1％伊文氏藍(lán)試劑的各組實(shí)驗(yàn)藥物至小鼠體內(nèi)，半小時(shí)后頸椎脫臼法處死小鼠，剪取小鼠背部皮膚測(cè)定藍(lán)斑直徑。將藍(lán)斑部位取0.5×0.5cm大小皮膚組織剪碎后加入10%b丙酮溶液中，37℃恒溫靜置24小時(shí)，分離上清液后在610°波長(zhǎng)測(cè)定吸光度。
　　結(jié)

6、果：文獻(xiàn)分析納入文獻(xiàn)26篇，其中核心期刊文獻(xiàn)2篇，臨床報(bào)道文獻(xiàn)22篇，涉及病例28例。獲得苦碟子注射液導(dǎo)致ADR臨床癥狀分布特點(diǎn)為：，呼吸系統(tǒng)癥狀如喘息、氣促、呼吸困難為最常見(jiàn)癥狀；全身反應(yīng)如寒戰(zhàn)、發(fā)熱為次常見(jiàn)癥狀；同時(shí)可能出現(xiàn)皮膚脫屑、藥疹、血壓升高、泌乳、過(guò)敏性休克等臨床表現(xiàn)。四種動(dòng)物模型的比較后發(fā)現(xiàn)，在藥物致敏敏感性方面豚鼠和C57BL/6小鼠的反應(yīng)性明顯強(qiáng)于SD大鼠和KM小鼠（P<0.05）。通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)豚鼠的癥狀表現(xiàn)記錄、血清相

7、關(guān)細(xì)胞因子的ELISA分析和肺部和皮膚組織的病理切片觀察，發(fā)現(xiàn)苦碟子注射液引起的ADR主要表現(xiàn)為呼吸系統(tǒng)癥狀，藥物導(dǎo)致過(guò)敏反應(yīng)發(fā)生的過(guò)程中超濾藥物和未經(jīng)超濾藥物在誘發(fā)過(guò)敏反應(yīng)概率和嚴(yán)重程度上具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。未超濾藥液明與陰性對(duì)照組具有明顯差異，1萬(wàn)倍超濾組難以引起過(guò)敏反應(yīng)。高劑量組誘發(fā)ADR發(fā)生的可能高于低劑量組。并非全部藥物均會(huì)引起ADR出現(xiàn)，經(jīng)10000倍超濾的藥物組中未見(jiàn)明顯過(guò)敏反應(yīng)動(dòng)物。藥物導(dǎo)致的過(guò)敏反應(yīng)會(huì)

8、引起血清內(nèi)總IgE、IL-4、LTC4、PGD2、TNF-α的升高；肺部組織中嗜酸性粒細(xì)胞的大量聚集。但不會(huì)明顯引起IL-2水平的下降。各實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物皮膚藍(lán)斑出現(xiàn)情況存在差異，除陰性對(duì)照組外，各組動(dòng)物均有藍(lán)斑出現(xiàn)，但大多數(shù)動(dòng)物藍(lán)斑直徑未達(dá)到過(guò)敏反應(yīng)陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)。各實(shí)驗(yàn)藥物組小鼠皮膚吸光度（OD值）均較陰性對(duì)照組升高（p<0.05），實(shí)驗(yàn)藥物組間對(duì)比結(jié)果顯示，陽(yáng)性對(duì)照組、加炭過(guò)濾組與高溫滅菌組中小鼠皮膚吸光度（OD值）明顯升高，提示藥物能夠

9、引起過(guò)敏反應(yīng)。超濾后各組皮膚吸光度升高不明顯，提示可能未引起過(guò)敏反應(yīng)。
　　結(jié)論：首先，苦碟子注射液引起的不良反應(yīng)癥狀中最常見(jiàn)的為呼吸系統(tǒng)癥狀，其次為全身反應(yīng)和神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，部分時(shí)候會(huì)引起皮膚黏膜出現(xiàn)藥疹或皮膚脫屑。最可能引起上述反應(yīng)的原因?yàn)樗侔l(fā)型超敏反應(yīng)或類過(guò)敏反應(yīng)。其次，豚鼠和C57BL/6小鼠能夠?qū)λ幬镆鸬倪^(guò)敏反應(yīng)有更加顯著的免疫應(yīng)答。豚鼠和C57BL/6小鼠更適合用于進(jìn)行藥物過(guò)敏實(shí)驗(yàn)研究。超濾工藝對(duì)苦碟子注射液不良反應(yīng)發(fā)