苦碟子注射液引起藥物不良反應的發(fā)生機制及其與不同制劑步驟和給藥劑量的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：通過對近十年內(nèi)苦碟子注射液引起ADR的文獻分析，明確苦碟子引起ADR的主要臨床癥狀和可能的作用機理。通過對不同種系大鼠、小鼠及豚鼠對常規(guī)劑量苦碟子注射液給藥后的臨床反應的觀察，篩選一種適于進行苦碟子注射液引起ADR機制研究的動物模型。對不同制劑階段和不同濃度的苦碟子注射液引起豚鼠主動全身過敏反應和SPF級C57BL/6小鼠被動皮膚過敏反應進行觀察。發(fā)現(xiàn)苦碟子注射液導致ADR與制劑工藝、藥物濃度等之間的相關(guān)性。
　　方法：首先

2、，檢索近十年來在國內(nèi)獲得公開發(fā)表并被中國學術(shù)期刊全文數(shù)據(jù)庫、重慶維普中文科技期刊全文數(shù)據(jù)庫、萬方數(shù)據(jù)庫中任意數(shù)據(jù)庫收錄的有關(guān)苦碟子注射液引起ADR的臨床報道或基礎(chǔ)研究。將所得資料通過循證手段，借鑒cochrane手冊中對文獻的分析方案。將文獻中包含的有關(guān)不良反應事件的臨床癥狀和可能機理進行匯總分析。最終判斷出苦碟子注射液引起的ADR最常見的臨床癥狀和最可能的作用機制。
　　其次選取SPF級SD大鼠、昆明種（KM）小鼠、C57BL/

3、6小鼠及普通級英國種遠交系豚鼠分為陽性對照組、陰性對照組和實驗藥物組。分別給與卵白蛋白、生理鹽水和實驗藥物進行致敏，致敏方法為隔日腹腔注射各組藥物4次。致敏后兩周單次激發(fā)動物，激發(fā)方式為豚鼠采用足趾靜脈推注給藥，大鼠和小鼠采用尾靜脈推注給藥的方式，分別給與致敏藥物2倍劑量藥物進行激發(fā)。通過觀察動物飼養(yǎng)過程中的存活率和動物激發(fā)后半小時內(nèi)的過敏癥狀表現(xiàn)評分，獲得一種或兩種適合進行過敏觀察的動物模型。用以進行主動全身過敏實驗和被動皮膚過敏實驗

4、。選取英國種遠交系豚鼠為實驗動物，根據(jù)給藥類別及劑量分為10組，分別給予動物篩選實驗相同方式進行致敏和激發(fā)，激發(fā)半小時后采用股動脈采血法采集豚鼠血液，斷頭法處死后采集豚鼠肺部和背部皮膚組織。將血液分離血清后進行ELISA檢驗，測定豚鼠血清內(nèi)總IgE、IL-2、IL-4、LTC4、PGD2及TNF-α表達情況，并對肺部和皮膚組織進行病理學檢查。選取SPF級C57BL/6小鼠為實驗動物，根據(jù)給藥類別及劑量分為10組。其中每組選取4只小鼠作為

5、抗血清制備組，分別隔日采用腹腔注射方法給與不同藥物4次進行致敏。致敏后兩周處死動物。眼球摘除取血法取小鼠血液分離血清。將抗血清按照組別注入實驗動物組各組動物背部。48小時后，采用尾靜脈推注混有1％伊文氏藍試劑的各組實驗藥物至小鼠體內(nèi)，半小時后頸椎脫臼法處死小鼠，剪取小鼠背部皮膚測定藍斑直徑。將藍斑部位取0.5×0.5cm大小皮膚組織剪碎后加入10%b丙酮溶液中，37℃恒溫靜置24小時，分離上清液后在610°波長測定吸光度。
　　結(jié)

6、果：文獻分析納入文獻26篇，其中核心期刊文獻2篇，臨床報道文獻22篇，涉及病例28例。獲得苦碟子注射液導致ADR臨床癥狀分布特點為：，呼吸系統(tǒng)癥狀如喘息、氣促、呼吸困難為最常見癥狀；全身反應如寒戰(zhàn)、發(fā)熱為次常見癥狀；同時可能出現(xiàn)皮膚脫屑、藥疹、血壓升高、泌乳、過敏性休克等臨床表現(xiàn)。四種動物模型的比較后發(fā)現(xiàn)，在藥物致敏敏感性方面豚鼠和C57BL/6小鼠的反應性明顯強于SD大鼠和KM小鼠（P<0.05）。通過對實驗豚鼠的癥狀表現(xiàn)記錄、血清相

7、關(guān)細胞因子的ELISA分析和肺部和皮膚組織的病理切片觀察，發(fā)現(xiàn)苦碟子注射液引起的ADR主要表現(xiàn)為呼吸系統(tǒng)癥狀，藥物導致過敏反應發(fā)生的過程中超濾藥物和未經(jīng)超濾藥物在誘發(fā)過敏反應概率和嚴重程度上具有顯著的統(tǒng)計學差異（P<0.05）。未超濾藥液明與陰性對照組具有明顯差異，1萬倍超濾組難以引起過敏反應。高劑量組誘發(fā)ADR發(fā)生的可能高于低劑量組。并非全部藥物均會引起ADR出現(xiàn)，經(jīng)10000倍超濾的藥物組中未見明顯過敏反應動物。藥物導致的過敏反應會

8、引起血清內(nèi)總IgE、IL-4、LTC4、PGD2、TNF-α的升高；肺部組織中嗜酸性粒細胞的大量聚集。但不會明顯引起IL-2水平的下降。各實驗組動物皮膚藍斑出現(xiàn)情況存在差異，除陰性對照組外，各組動物均有藍斑出現(xiàn)，但大多數(shù)動物藍斑直徑未達到過敏反應陽性判斷標準。各實驗藥物組小鼠皮膚吸光度（OD值）均較陰性對照組升高（p<0.05），實驗藥物組間對比結(jié)果顯示，陽性對照組、加炭過濾組與高溫滅菌組中小鼠皮膚吸光度（OD值）明顯升高，提示藥物能夠

9、引起過敏反應。超濾后各組皮膚吸光度升高不明顯，提示可能未引起過敏反應。
　　結(jié)論：首先，苦碟子注射液引起的不良反應癥狀中最常見的為呼吸系統(tǒng)癥狀，其次為全身反應和神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，部分時候會引起皮膚黏膜出現(xiàn)藥疹或皮膚脫屑。最可能引起上述反應的原因為速發(fā)型超敏反應或類過敏反應。其次，豚鼠和C57BL/6小鼠能夠?qū)λ幬镆鸬倪^敏反應有更加顯著的免疫應答。豚鼠和C57BL/6小鼠更適合用于進行藥物過敏實驗研究。超濾工藝對苦碟子注射液不良反應發(fā)