單寧酸銀凝膠在大鼠燒傷創(chuàng)面抗菌活性和愈合作用的研究.pdf

1、研究目的：感染是燒傷死亡的主要原因之一，而創(chuàng)面是燒傷感染的主要途徑，局部抗菌劑應用是預防和治療創(chuàng)面感染的有效方法，金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌是目前燒傷創(chuàng)面感染最主要細菌。本研究通過探討單寧酸銀凝膠對大鼠Ⅲ度燒傷創(chuàng)面感染金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌的抗菌活性和創(chuàng)面愈合作用，試圖為尋找一種新的外用含銀抗菌劑提供實驗理論依據(jù)。
　　研究方法：1.抗菌活性實驗
　　(1)抗金黃色葡萄球菌活性實驗:
　　96只健康雄性Wist

2、ar大鼠，戊巴比妥鈉溶液（按照80mg/kg）經(jīng)腹腔注射麻醉后，用100℃開水制造一個大小為5cm×3cm的Ⅲ度燙傷創(chuàng)面。燙傷后立即進行乳酸林格氏液腹腔注射補液復蘇(4ml/kg/％TBSA)。10 min后在燙傷創(chuàng)面涂以1ml濃度大小為1×108cfu/ml金黃色葡萄球菌溶液。24小時后采用數(shù)字隨機表法將動物隨機分成4組，其中組Ⅰ（生理鹽水組，n=24）、組Ⅱ（單寧酸銀凝膠組，n=24）、組Ⅲ（銀離子抗菌劑組，n=24）和組Ⅳ（1％磺

3、胺嘧啶銀組，n=24）。每天創(chuàng)面局部用藥治療+無菌紗布覆蓋，其中組Ⅰ用生理鹽水、組Ⅱ用單寧酸銀凝膠、組Ⅲ用銀離子抗菌劑、組Ⅳ用1％的磺胺嘧啶銀懸液。分別于換藥后第1、3、5、7天取焦痂下組織做細菌定量培養(yǎng)，第7天取脊柱旁肌肉組織做細菌定量培養(yǎng)、心臟采血行血常規(guī)白細胞計數(shù)，并取焦痂下組織和脊柱旁肌肉組織做HE染色和Geimsa染色并評分。用SPSS19.0統(tǒng)計學軟件處理數(shù)據(jù)，對資料進行正態(tài)性檢驗，非正態(tài)資料兩兩比較用Mann-Whitne

4、y U檢驗;多組間比較用Kruskal--Wallis H檢驗。p＜0.05有統(tǒng)計學意義。
　　(2)抗銅綠假單胞菌活性實驗:
　　方法同抗金黃色葡萄球菌活性實驗。只是制造感染模型時創(chuàng)面涂以1ml1×108cfu/ml、處于對數(shù)生長期的銅綠假單胞菌標準菌株。
　　2.創(chuàng)面愈合作用實驗
　　取40只健康雄性Wistar大鼠，戊巴比妥鈉溶液（按照80mg/kg）經(jīng)腹腔注射麻醉后，用100℃開水制造一個大小為5cm×3

5、cm的Ⅲ度燙傷創(chuàng)面。燙傷后立即進行乳酸林格氏液腹腔注射補液復蘇(4m l/kg/％TBSA)。采用數(shù)字隨機表法將動物隨機分成4組，其中組Ⅰ（生理鹽水組，n=10）、組Ⅱ(單寧酸銀凝膠組，n=10)、組Ⅲ（銀離子抗菌劑組，n=10）和組Ⅳ（1％磺胺嘧啶銀組，n=10）。每天創(chuàng)面局部用藥治療+無菌紗布覆蓋，其中組Ⅰ用生理鹽水、組Ⅱ用單寧酸銀凝膠、組Ⅲ用銀離子抗菌劑、組Ⅳ用1％的磺胺嘧啶銀懸液。于傷后第7、14、21、28天采用透明塑料薄膜描

6、繪創(chuàng)面大小，并記錄每只大鼠創(chuàng)面完全愈合的時間。第21天取組織做HE染色。用ImageJ軟件處理計算出面積大小，然后計算創(chuàng)面的收縮率。所有數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差表示，用SPSS19.0統(tǒng)計學軟件處理數(shù)據(jù)，采用單因素方差分析，兩獨立樣本比較采用t檢驗，多組資料間兩兩比較采用LSD-t法。p＜0.05有統(tǒng)計學意義。
　　3.體外細胞毒性實驗
　　(1)將大鼠角質細胞按104/孔接種在96孔板中，將細胞分為5組，每組設5個復孔，分別加入

7、零濃度、低濃度、中濃度、高濃度單寧酸銀凝膠和DMSO空白對照液100μ l，置37℃恒溫箱培養(yǎng)。采用MTT法，分別于培養(yǎng)后24h、48h、72h檢測角質細胞的存活率，并做統(tǒng)計學分析。
　　(2)采用同樣的方法，檢測單寧酸銀凝膠對大鼠成纖維細胞的毒性。
　　研究結果：1.抗菌活性實驗結果
　　(2)抗金葡菌活性實驗結果:
　　治療后第7天，痂下組織細菌定量培養(yǎng)發(fā)現(xiàn):組Ⅱ（3.3±0.9×105cfu/g）與組Ⅰ(1

8、2.4±1.4×106cfu/g)、組Ⅲ(5.4±1.1×105cfu/g)及組Ⅳ(9.1±0.9×105cfu/g)之間比較均有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。肌肉組織細菌定量結果提示:組Ⅱ(2.9±0.9×104cfu/g)與組Ⅲ（5.2±1.2×104cfu/g）組Ⅳ（8.2±0.9×104cfu/g）之間也有統(tǒng)計學差異(p＜0.05)。HE染色:組Ⅱ輕度炎癥反應，而組Ⅰ重度炎癥反應;Geimsa染色:組Ⅱ輕度細菌定植，而組Ⅰ見大量細

9、菌定植，肌肉Geimsa染色評分:組Ⅱ與組Ⅰ、組Ⅳ之間存在統(tǒng)計學差異(p＜0.05)。
　　(2)抗綠膿桿菌活性實驗結果:
　　治療后第7天，痂下組織細菌定量培養(yǎng)發(fā)現(xiàn):組Ⅱ（3.1±0.9×105cfu/g）與組Ⅰ(13.4±1.1×106cfu/g)，組Ⅲ（9.2±0.8×105cfu/g）與組Ⅳ(5.5±0.9×105cfu/g)兩兩之間比較均有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。肌肉組織細菌定量結果提示:組Ⅱ（2.6±0.9×

10、104cfu/g）與組Ⅲ（8.1±0.9×104cfu/g）組Ⅳ(4.7±1.1×104cfu/g)之間也有統(tǒng)計學差異(p＜0.05)。HE染色:組Ⅱ輕度炎癥反應，組Ⅰ而組重度炎癥反應;Geimsa染色:組Ⅱ輕度細菌定植，而組Ⅰ大量細菌定植，肌肉Geimsa染色評分-組Ⅱ與組Ⅰ、組Ⅲ之間存在統(tǒng)計學差異(p＜0.05)。
　　2.創(chuàng)面愈合作用實驗結果
　　治療后14天以后，組Ⅱ大鼠創(chuàng)面愈合速度加快。第21天，組Ⅱ創(chuàng)面收縮率(6

11、5.1±1.3％)與組Ⅰ(54.8±1.8％)、組Ⅳ(58.4±1.9％)之間差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)，第28天，組Ⅱ的創(chuàng)面收縮率與其它組之間差別均有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。組Ⅰ大鼠燒傷創(chuàng)面完全愈合的時間為35.9±1.4d，組Ⅱ為30.5±1.3d，組Ⅲ為31.8±1.5 d，組Ⅳ大鼠為33.4±1.5 d。組Ⅱ與組Ⅰ、組Ⅲ、組Ⅳ之間均有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。第21天病理形態(tài)學，組Ⅱ壞死組織已脫落，有較多的毛細血管生

12、成;而組Ⅰ未愈合創(chuàng)面仍有較多壞死組織覆蓋，炎癥反應較重。
　　3.體外細胞毒性實驗結果
　　(1)不同單寧酸銀凝膠濃度下，在不同培養(yǎng)時間點角質細胞的成活率不同，與培養(yǎng)后24h的比較，低濃度組在72h角質細胞成活率降低(92.8±1.5％vs97.1±1.7％)，有統(tǒng)計學差異(p＜0.05)，中等濃度組和高濃度組在48h和72h角質細胞成活率均降低，有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。
　　(2)與培養(yǎng)后24h的比較，低濃度組

13、在72h成纖維細胞成活率降低(91.4±1.7％vs96.3±1.3％)有統(tǒng)計學差異(p＜0.05)，中等濃度組和高濃度組在48h和72h成纖維細胞成活率均降低，有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。
　　研究結論：1.單寧酸銀凝膠對于大鼠燒傷創(chuàng)面感染金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌的抗菌作用明顯。
　　2.單寧酸銀凝膠對大鼠燒傷創(chuàng)面的愈合具有一定的促進作用。
　　3.低濃度單寧酸銀凝膠（Ag的濃度為27.2mg/L）對大鼠角質細