小鼠內(nèi)質(zhì)網(wǎng)體中FKBP23結(jié)晶的研究.pdf

1、FKBP23屬于親免蛋白(Immunophilin)家族的成員。親免蛋白具有兩大主要特征：一是遺傳上的保守性，即從低等生物、植物、動(dòng)物直至人等高級(jí)哺乳動(dòng)物的體內(nèi)均有親免蛋白存在；二是均具有肽脯氨酰順?lè)串悩?gòu)酶(PPIase)活性。FKBP的PPIase活性能被與之結(jié)合的用于器官移植的免疫抑制劑FK506所抑制。mFKBP23的N端具肽脯氨酰順?lè)串悩?gòu)酶(PPIase)活性，C端有兩個(gè)EF手模體，具有鈣離子結(jié)合能力。我們的課題組已經(jīng)從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)體

2、中蛋白質(zhì)輸送和分泌的方向入手，發(fā)現(xiàn)了mFKBP23與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)體中的分子伴侶Hsp70家族的一員BiP特異性結(jié)合，并且該結(jié)合受到鈣離子濃度的調(diào)控。mFKBP23與mBiP結(jié)合后，其N(xiāo)端的PPIase活性結(jié)構(gòu)對(duì)BiP的ATPase活性具有調(diào)節(jié)作用。 鑒于以上的結(jié)論，我們推測(cè)鈣離子會(huì)影響FKBP23的結(jié)構(gòu)，F(xiàn)KBP23結(jié)合鈣離子后會(huì)發(fā)生結(jié)構(gòu)上細(xì)微的變化。在本課題中我們?cè)诖竽c桿菌中大量表達(dá)克隆的mFBKP23蛋白質(zhì)，經(jīng)過(guò)一系列的純化和濃

3、縮過(guò)程，得到高純度和高濃度的mFKBP23蛋白質(zhì)溶液，然后利用氣相擴(kuò)散懸滴法和CrystalScreenKit試劑，將mFKBP23蛋白質(zhì)溶液在不同的Ca2+濃度的結(jié)晶緩沖液中進(jìn)行結(jié)晶。我們?cè)噲D得到不同鈣離子濃度下的mFBKP23晶體，利用X光衍射技術(shù)分析它們的結(jié)構(gòu)，發(fā)現(xiàn)FKBP23結(jié)合鈣離子與不結(jié)合鈣離子時(shí)的結(jié)構(gòu)上的差異，從而證實(shí)我們的推測(cè)，為解釋mFKBP23與mBiP特異性結(jié)合受鈣離子濃度調(diào)控的機(jī)制，以及為進(jìn)一步探索這個(gè)親免蛋白的