內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在高氧導(dǎo)致新生小鼠腦白質(zhì)損傷中的調(diào)控作用.pdf

1、目的：使用80％氧暴露導(dǎo)致新生小鼠腦白質(zhì)損傷模型，觀察內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志物GRP78、PERK、CHOP、Caspase-12在不同高氧暴露時間下的表達(dá)，探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激是否參與調(diào)控高氧導(dǎo)致的新生鼠腦白質(zhì)凋亡。
　　方法：新生6天的C57BL/6小鼠共16組，隨機(jī)分為高氧組（80%O2）及對照組（21%O2）各8組。分別于高氧6h、12h、24h、48h，高氧48h后2d（P10）、4d（P12）、7d（P15）、22d（P30）斷頭取

2、腦，與對照組比較。透射電鏡檢測不同日齡小鼠腦白質(zhì)髓鞘化改變；免疫組化法檢測不同日齡胼胝體部位MBP的表達(dá)變化；TUNEL法檢測P12、P15天小鼠腦白質(zhì)原位細(xì)胞凋亡情況。采用RT-PCR和免疫蛋白印跡法檢測GRP78、PERK、CHOP在高氧6h、12h、24h、48h后mRNA和蛋白表達(dá)變化；RT-PCR法檢測高氧24h及48h后小鼠腦白質(zhì)中Caspase-12基因的表達(dá)情況，免疫蛋白印跡法和免疫組化法檢測高氧24h及48h后小鼠腦白

3、質(zhì)中Caspase-12蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：1.高氧對腦白質(zhì)的損傷：（1）透射電鏡下，P15高氧組未見成熟的髓鞘結(jié)構(gòu)，對照組髓鞘化完整；P30高氧組髓鞘平均厚度和軸突直徑較對照組明顯降低，出現(xiàn)異常的未折疊的髓鞘和異常的環(huán)形結(jié)構(gòu)髓鞘。（2）腦白質(zhì)MBP表達(dá)：P10、P12高氧組MBP表達(dá)明顯低于對照組（P=0.002，0.001）；P15、P30高氧組與對照組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.081，0.106）。2.腦白質(zhì)原

4、位細(xì)胞凋亡指數(shù)（AI）：P12、P15高氧組明顯高于對照組（P=0.001，0.030）。3.內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)分子表達(dá)：（1）GRP78表達(dá)：RT-PCR和western結(jié)果示，高氧組與對照組比較，6h明顯增高（P=0.001，0.004），12h、24h、48h差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.367，0.073；0.577，0.724；0.546，0.812）。（2）PERK表達(dá)：RT-PCR和western結(jié)果示，高氧組與對照組比較，6h明

5、顯升高（P=0.001，0.001），12h、24h、48h差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.458，0.131；0.843，0.200；0.966，0.583）。（3）CHOP表達(dá)：RT-PCR和western結(jié)果示，高氧組與對照組比較，12h明顯增高（P=0.01，0.003），6h、24h、48h差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.707，0.182；0.354，0.841；0.758，0.737）。（4）Caspase-12 mRNA表達(dá)：高氧組

6、與對照組比較，24h、48h明顯增高（P=0.001，0.001）。Caspase-12蛋白表達(dá)：western結(jié)果示，高氧組與對照組比較，24h、48h明顯增高（P=0.001，0.001）；免疫組化結(jié)果示，高氧組與對照組比較，24h、48h Caspase-12抗原表達(dá)陽性細(xì)胞顯著增加。
　　結(jié)論：高氧暴露可導(dǎo)致新生小鼠腦白質(zhì)損傷，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激啟動的凋亡途徑參與其中，并發(fā)揮重要作用。在高氧初期（6h），ER啟動了未折疊蛋白反應(yīng)，