前列腺ICC介導交感神經(jīng)信號調控平滑肌活動的功能初探.pdf

1、本文主要從以下幾個部分展開論述：
　　第一部分 豚鼠前列腺ICC介導交感神經(jīng)信號的形態(tài)學研究
　　實驗1：前列腺ICC與神經(jīng)和平滑肌的超微形態(tài)學聯(lián)系
　　目的：觀察前列腺ICC超微結構特點以及與前列腺神經(jīng)、平滑肌細胞之間的超微結構聯(lián)系。
　　方法：制作豚鼠前列腺超薄組織切片，透射電鏡下依據(jù)超微結構特點辨識ICC并觀察其與神經(jīng)、平滑肌細胞之間的超微結構聯(lián)系。
　　結果：豚鼠前列腺組織內存在符合典型ICC超微結

2、構鑒定標準的間質細胞，這些前列腺ICC分布于腺上皮和平滑肌組織之間的間質中以及平滑肌細胞之間，與相鄰的神經(jīng)末梢形成突觸樣連接，同一ICC可以通過突觸樣連接和多個的神經(jīng)末梢相鄰。ICC和周圍的平滑肌細胞密切接觸，之間存在縫隙連接和直接接觸等連接形式。
　　結論：豚鼠前列腺ICC具有介導前列腺神經(jīng)信號，調控平滑肌活動的超微形態(tài)學基礎。
　　第一部分 豚鼠前列腺ICC介導交感神經(jīng)信號的形態(tài)學研究
　　實驗2：前列腺ICC與交

3、感神經(jīng)和平滑肌的組織形態(tài)學聯(lián)系
　　目的：觀察前列腺ICC和交感神經(jīng)以及平滑肌細胞之間的組織形態(tài)學聯(lián)系。
　　方法：制作豚鼠前列腺組織冰凍切片并進行免疫熒光染色。使用c-Kit抗體標記ICC， TH和DβH抗體標記交感神經(jīng)纖維，α-actin抗體標記平滑肌細胞，分別采用c-Kit和TH抗體，c-Kit和DβH抗體，c-Kit和α-actin抗體組合進行免疫熒光雙染色標記實驗。
　　結果：前列腺ICC分布于TH、DβH陽

4、性的交感神經(jīng)周圍，多沿交感神經(jīng)纖維平行分布并和神經(jīng)纖維形成密切、廣泛的接觸。ICC的胞體和細胞突起緊貼相鄰的平滑肌細胞形成密切的接觸聯(lián)系。前列腺ICC自身表達交感神經(jīng)標記物TH和DβH。
　　結論：豚鼠前列腺ICC具有介導前列腺交感神經(jīng)信號，調控平滑肌活動的組織形態(tài)學基礎以及自身合成兒茶酚胺的潛能。
　　第二部分 豚鼠前列腺ICC介導交感神經(jīng)信號的功能學研究
　　實驗1：α1受體和Cx43等功能蛋白在前列腺ICC上的表

5、達
　　目的：觀察α1腎上腺素受體和縫隙連接Cx43等功能蛋白在前列腺ICC上的表達。
　　方法：制作豚鼠前列腺組織冰凍切片，分離、培養(yǎng)前列腺ICC并進行免疫熒光染色。分別采用c-Kit和α1受體抗體，c-Kit和Cx43抗體組合進行免疫熒光雙染色標記實驗。
　　結果：前列腺組織內ICC上存在α1受體和Cx43等功能蛋白的表達，其中ICC上α1受體的表達明顯強于周圍的平滑肌。分離、培養(yǎng)的前列腺ICC上同樣表達α1受體和

6、Cx43。
　　結論：前列腺ICC為交感神經(jīng)的靶細胞，并可能借助細胞膜上的Cx43與周圍平滑肌細胞形成信息傳遞的通道。
　　第二部分 豚鼠前列腺ICC介導交感神經(jīng)信號的功能學研究
　　實驗2：交感神經(jīng)遞質NE對前列腺ICC興奮性的影響
　　目的：觀察前列腺ICC對交感神經(jīng)遞質NE的反應性。
　　方法：體外分離、培養(yǎng)、鑒定前列腺ICC，采用全細胞膜片鉗技術記錄NE誘發(fā)ICC產(chǎn)生的電流，并進一步觀察使用α受體阻

7、滯劑酚妥拉明和α1受體阻滯劑哌唑嗪前后ICC細胞電流的變化。
　　結果：在前列腺ICC上沒有記錄到自發(fā)的內向電流（n=6），當電壓鉗制在?60mV時NE可以誘發(fā)前列腺ICC產(chǎn)生顯著的內向電流(n=6)。1μmol NE、10μmol NE、100μmol NE誘發(fā)的內向電流為?106±29 pA、?210±68pA和?368±113pA。誘發(fā)的內向電流幅度和NE具有一定的量效關系(P<0.01)。在使用α受體阻滯劑酚妥拉明和α1受

8、體阻滯劑哌唑嗪后，NE未誘發(fā)ICC產(chǎn)生明顯的內向電流。
　　結論：前列腺ICC為前列腺交感神經(jīng)信號的功能性靶細胞，α1受體為ICC介導交感神經(jīng)信號的功能學基礎。
　　第二部分 豚鼠前列腺ICC介導交感神經(jīng)信號的功能學研究
　　實驗3：前列腺ICC在交感神經(jīng)遞質誘發(fā)平滑肌活動中的作用
　　目的：探索前列腺ICC在交感神經(jīng)遞質NE誘發(fā)平滑肌活動中的作用。
　　方法：制作前列腺平滑肌肌條，將肌條固定于灌流槽中，記

9、錄NE誘發(fā)的前列腺肌條收縮幅度和頻率，以及加入Glivec后收縮幅度和頻率的變化。
　　結果：在體外NE（50μmol/L）可以誘發(fā)前列腺肌條產(chǎn)生明顯的收縮活動，收縮幅度為0.98±0.16 g，收縮頻率為2.54±0.28次/分。使用Glivec后肌條收縮幅度顯著下降，50μmol/L組為0.56±0.07 g（P<0.01），200μmol/L組為0.25±0.05 g（P<0.01）；收縮頻率50μmol/L組為2.67±0