從神經(jīng)-ICC-平滑肌網(wǎng)絡(luò)探討補(bǔ)腎縮尿法對膀胱過度活動(dòng)癥的作用機(jī)制.pdf

1、目的:
　　膀胱過度活動(dòng)癥（Overactive Bladder，OAB）作為一種以下尿路病理和尿急癥狀為特征的病癥，其明顯對患者的日常生活和社會(huì)活動(dòng)造成極大的干擾，已經(jīng)成為困擾人們的一大疾病。神經(jīng)-ICC-平滑肌網(wǎng)絡(luò)作為新近認(rèn)為是OAB的其中一個(gè)致病原因，日益受到研究人員關(guān)注的研究熱點(diǎn)?？s泉丸的功效為補(bǔ)腎縮尿，固脫止遺。腎氣丸功效為溫補(bǔ)腎陽，振奮陽氣，縮泉丸與腎氣丸合用在治療OAB上有良好的療效。本課題以神經(jīng)-ICC-平滑肌網(wǎng)絡(luò)

2、為切入點(diǎn)，研究補(bǔ)腎縮尿法對OAB的作用機(jī)制。
　　方法:
　　本研究以膀胱出口梗阻模型作為OAB的研究模型。將豚鼠分為正常組、模型組、陽性組、縮泉丸組、腎氣丸組和縮泉丸聯(lián)用腎氣丸組六個(gè)組。分成三部分1、補(bǔ)腎縮尿法對豚鼠OAB的治療作用:測各組的排尿次數(shù)、排尿量、尿動(dòng)力參數(shù)和離體肌條功能參數(shù)。2、研究補(bǔ)腎縮尿法對OAB豚鼠膀胱神經(jīng)-ICC-平滑肌網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的影響:通過組織免疫熒光法觀察膀胱ICC、乙酰膽堿能神經(jīng)(VAChT)、P

3、物質(zhì)肽能神經(jīng)的相對含量變化，以及透射電鏡觀察整體膀胱神經(jīng)-ICC-平滑肌網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu);3、研究補(bǔ)腎縮尿法對OAB豚鼠膀胱神經(jīng)-ICC-平滑肌網(wǎng)絡(luò)信號(hào)傳導(dǎo)的影響:通過組織免疫熒光雙標(biāo)觀察ICC與M3、P2X5受體亞型的共表達(dá)情況，觀察補(bǔ)腎縮尿法是否作用于ICC上的M3和P2X5受體，以及采用熒光定量PCR法、westernblotting法檢測ICC-平滑肌網(wǎng)絡(luò)縫隙連接蛋白Cx43mRNA及蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1、模型組

4、能顯著增加豚鼠排尿次數(shù)，增加膀胱漏尿點(diǎn)壓力(BLPP)，最大膀胱壓(MVP)及殘余尿量(PVR)的作用(P＜0.05);模型組顯著提高了膀胱肌條對激動(dòng)劑的刺激敏感性，對由于KCL激動(dòng)劑引起的收縮和Carbachol引起的收縮有顯著性提高(P＜0.05);模型組ICC相對表達(dá)量顯著升高，而肽能神經(jīng)的相對表達(dá)量顯著降低(P＜0.05)，模型組膀胱神經(jīng)-ICC-平滑肌網(wǎng)絡(luò)之間的連接更為緊密;ICC上神經(jīng)受體M3和P2X5表達(dá)量在造模后顯著升高

5、(P＜0.05)，縫隙連接蛋白Cx43的mRNA和蛋白表達(dá)量顯著升高(P＜0.01)。
　　2、補(bǔ)腎縮尿法對豚鼠OAB的治療作用:用托特羅定、縮泉丸或縮泉丸聯(lián)用腎氣丸組治療能減少OAB模型豚鼠的排尿次數(shù)(P＜0.05)，托特羅定、縮泉丸、腎氣丸以及縮泉丸聯(lián)用腎氣丸組有不同程度降低BLPP、MVP及PVR的作用(P＜0.05)。托特羅定、縮泉丸以及縮泉丸聯(lián)用腎氣丸組均有不同程度顯著性降低由于KCL激動(dòng)劑所引起的肌條收縮作用(P＜0.

6、05)，并在Carbachol不同濃度影響下的收縮作用均有顯著性降低(P＜0.05）。
　　3、補(bǔ)腎縮尿法對OAB豚鼠膀胱神經(jīng)-ICC-平滑肌網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的影響:免疫熒光結(jié)果顯示，給予縮泉丸、腎氣丸和縮泉丸聯(lián)用腎氣丸有不同程度降低ICC細(xì)胞和提高神經(jīng)纖維P物質(zhì)的相對表達(dá)量，其中縮泉丸聯(lián)用腎氣丸效果最為顯著(P＜0.05，P＜0.01)。透射電鏡圖顯示，分別給予托特羅定，縮泉丸，腎氣丸或補(bǔ)腎縮尿法治療后，均有不同程度改善神經(jīng)-ICC-平

7、滑肌結(jié)構(gòu)間的聯(lián)系，聯(lián)系減少。
　　4、補(bǔ)腎縮尿法對OAB豚鼠膀胱神經(jīng)-ICC-平滑肌網(wǎng)絡(luò)信號(hào)傳導(dǎo)的影響:對神經(jīng)受體與ICC的免疫熒光雙標(biāo)結(jié)果顯示，補(bǔ)腎縮尿法治療后，ICC細(xì)胞上的M3神經(jīng)受體表達(dá)顯著下降(P＜0.05);縮泉丸聯(lián)用腎氣丸干預(yù)后，膀胱縫隙連接蛋白Cx43mRNA和蛋白表達(dá)量呈極顯著下降(P＜0.01），證明縮泉丸聯(lián)用腎氣丸能夠通過減少?zèng)_動(dòng)信號(hào)的傳遞而達(dá)到調(diào)節(jié)膀胱功能。
　　結(jié)論:
　　1、模型組能增加排尿

8、次數(shù)，伴有平滑肌不穩(wěn)定收縮，并對激動(dòng)劑的敏感性伴有顯著性升高，代表造模成功。其中膀胱ICC數(shù)量升高，代表OAB的發(fā)生與ICC數(shù)量變化有關(guān)。
　　2、縮泉丸聯(lián)用腎氣丸組明顯改善OAB豚鼠排尿次數(shù)，能夠減少膀胱漏尿點(diǎn)壓力(BLPP)、最大膀胱壓(MVP)及殘余尿量(PVR)，改善膀胱肌條張力活動(dòng)，初步證明補(bǔ)腎縮尿法具有改善OAB膀胱病理狀態(tài)的作用。
　　3、模型組ICC數(shù)量明顯增加，神經(jīng)纖維數(shù)量明顯增加，透射電鏡結(jié)果顯示神經(jīng)-I