抗早顆粒對雌性性早熟大鼠Kiss-1-GPR54mRNA表達(dá)的影響及臨床研究.pdf

1、目的:
　　 本文以達(dá)那唑誘導(dǎo)的雌性性早熟大鼠為模型,通過觀察調(diào)控青春期發(fā)育的關(guān)鍵分子下丘腦Kiss-1基因衍生肽kisspeptin及其受體GPR54(G-proteincoupedreceptor54)在青春期發(fā)育不同時期的表達(dá)規(guī)律,探討kisspeptin/GPR54在青春啟動時的作用;觀察中藥抗早顆粒對kisspeptin/GPR54表達(dá)的影響以及kisspeptin/GPR54在抗早顆粒治療性早熟中的作用,進(jìn)一步認(rèn)識抗

2、早顆粒的作用機制;抗早顆粒治療特發(fā)性中樞性性早熟女童臨床療效觀察,研究抗早顆粒對性早熟女童雌二醇(E2)、促黃體生成素(LH)、促卵泡生成素(FSH)、胰島素樣生長因子(IGF-1)的影響,以及抗早顆粒改善性早熟女童的中醫(yī)證候優(yōu)勢,探討抗早顆粒的作用機制;評價抗早顆粒治療本病的臨床經(jīng)濟(jì)學(xué)意義。方法:
　　 (1)出生后3天的SD雌性大鼠,隨母鼠共同飼養(yǎng),隨機分為正常對照A組(青春前期)、正常對照B組(青春早期)、實驗A組(青春早

3、期)、實驗B組(青春中期)。實驗組大鼠在出生后5日齡給予皮下注射300ug達(dá)那唑。采用熒光定量PCR技術(shù)分別觀察青春期啟動前(出生后23日齡)、青春期啟動(陰門開啟為標(biāo)志)、青春期啟動后(建立2個規(guī)則的性周期)大鼠下丘腦Kiss-1/GPR54mRNA的表達(dá)規(guī)律。
　　 (2)出生后3天的SD雌性大鼠,隨母鼠共同飼養(yǎng),隨機分為正常組、模型組、曲普瑞林組、中藥組(大劑量組、中劑量組、小劑量組),每組6只。模型組、曲普瑞林組和中藥組

4、大鼠在出生后5日齡給予皮下注射300ug達(dá)那唑。曲普瑞林組大鼠15日開始用曲普瑞林100ug/kg,皮下注射,1次/日,同時中藥組灌胃中藥,1次/日,大劑量60ml/kg,中劑量30ml/kg,小劑量15ml/kg。同時模型組給予生理鹽水1ml/只灌胃。模型組大鼠建立第一個發(fā)情期后于動情前期將該動物處死,其余各組按1:1比例同時處死。計算卵巢指數(shù)和子宮指數(shù),觀察卵巢組織切片黃體的出現(xiàn)情況,ELISA法測定血清E2、LH、IGF-1水平,

5、熒光定量PCR技術(shù)測定大鼠下丘腦GnRH/GnRH-RmRNA、Kiss-1/GPR54mRNA的表達(dá)變化,探討抗早顆粒對Kiss-1/GPR54mRNA表達(dá)的影響及抗早顆粒治療性早熟的作用機制。
　　 (3)臨床觀察將特發(fā)性中樞性性早熟女童隨機分2組,中藥組62例,西藥組31例。中藥組口服抗早顆粒每日1劑,溫水沖100ml,分2次口服,連服6個月;西藥組肌肉注射鹽酸曲普瑞林(達(dá)菲林),按60～100ug/kg,28天1次,連續(xù)

6、6個月。觀察治療前后兩組的療效,研究抗早顆粒改善性早熟女童的中醫(yī)證候的優(yōu)勢,分析抗早顆粒對性早熟女童LH、FSH、E2、IGF-1的影響,以及性早熟女童體重指數(shù)(BMI)與E2、IGF-1的相關(guān)性,探討抗早顆粒的作用機制;評價抗早顆粒治療本病的臨床經(jīng)濟(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 (1)實驗組5日齡雌性大鼠皮下注射達(dá)那唑后,陰門開啟和建立兩個規(guī)則的性周期時間明顯提前,卵巢和子宮的臟器指數(shù)較正常對照A組大鼠明顯增加;青春期

7、啟動時下丘腦GnRHmRNA的表達(dá)水平較正常對照A組顯著升高。正常對照A組(正常青春前期)、模型A組(青春期早期)、模型B組(青春期中期)的Kiss-1mRNA和GPR54mRNA的表達(dá)逐漸增高,提示Kiss-1/GPR54mRNA的表達(dá)與生長發(fā)育的各個時期密切相關(guān)。同時觀察到青春期啟動時正常大鼠下丘腦Kiss-1/GPR54mRNA表達(dá)增加,與GnRH的增加趨于同步。
　　 (2)觀察到抗早顆?？梢越档托栽缡炷Ｐ痛笫笱錏2、

8、LH、IGF-1水平,治療前后有非常顯著性差異(P＜0.01)。熒光定量PCR技術(shù)觀察到中藥高、中、低劑量組、曲普瑞林組大鼠下丘腦GnRH、Kiss-1及GPR54mRNA.含量明顯降低,與模型組比較,有顯著性差異(P＜0.01)。表明抗旱顆粒可下調(diào)性早熟模型大鼠下丘腦Kiss-1、GPR54及GnRHmRNA的表達(dá)。
　　 (3)臨床觀察中藥組有效率達(dá)83.87％,西藥組有效率87.09％,兩組療效無顯著性差異(P＞0.05)

9、,中藥組與西藥組療效相當(dāng);兩組治療后顯著降低患兒血清FSH、LH及E2水平,子宮卵巢明顯回縮,第二性征消退。中藥組可顯著改善性早熟女童形體偏胖、面赤口渴、肢體困倦、大便干結(jié)等中醫(yī)證候,與西藥組比較,有顯著性差異(P＜0.05)。
　　 (4)臨床經(jīng)濟(jì)學(xué)評價,成本-效價比中藥組顯著優(yōu)于西藥組。
　　 結(jié)論:
　　 (1)性早熟大鼠青春期啟動時kisspeptin/GPR54的表達(dá)異常,下丘腦Kiss-1/GPR54

10、mRNA的表達(dá)水平增高,可能參與并促進(jìn)大鼠下丘腦-垂體-性腺軸(HPGA)的提前啟動,導(dǎo)致大鼠性早熟的發(fā)生。
　　 (2)抗早顆?？赏ㄟ^下調(diào)下丘腦Kiss-1/GPR54mRNA的表達(dá),抑制GnRH的釋放,延緩性早熟大鼠下丘腦-垂體-性腺軸的啟動。
　　 (3)抗早顆粒臨床與曲普瑞林療效相當(dāng),可能對性早熟患兒下丘腦-垂體-性腺軸功能有抑制作用。成本-效價比中藥組顯著優(yōu)于西藥組,顯示抗早顆粒中藥有進(jìn)一步研究開發(fā)推廣的價值。