Kiss1基因及其受體GPR54與結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移特性的相關(guān)研究.pdf

1、第一部分KiSS1基因及受體GPR54在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及臨床病理意義
　　 目的：
　　 1、檢測(cè)Kiss1基因在結(jié)直腸癌組織及其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)情況，探討Kiss1基因與結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移的關(guān)系；
　　 2、檢測(cè)Kiss1基因產(chǎn)物的受體GPR54在結(jié)直腸癌組織及其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)情況，探討該受體與結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移的關(guān)系；
　　 3、研究Kiss1基因與GPR54在結(jié)直腸癌發(fā)生轉(zhuǎn)移過(guò)程中的相關(guān)性。

2、r>　　 方法：
　　 1、應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色S-P法檢測(cè)121例結(jié)直腸癌原發(fā)灶及其61例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中Kiss1基因的表達(dá)，分析其與結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移等臨床病理特性之間的關(guān)系；
　　 2、應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色S-P法檢測(cè)121例結(jié)直腸癌原發(fā)灶及其61例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中GPR54的表達(dá)，分析其與結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移等臨床病理特性之間的關(guān)系；
　　 3、分析Kiss1基因和受體GPR54在結(jié)直腸癌組織中表達(dá)的相關(guān)性。
　

3、　 結(jié)果：
　　 1、結(jié)直腸癌原發(fā)灶中Kiss1基因表達(dá)水平與結(jié)直腸癌患者性別、年齡、病理類型、分化程度、浸潤(rùn)程度、脈管內(nèi)癌栓、神經(jīng)浸潤(rùn)、淋巴管內(nèi)癌栓和腫瘤壞死等特性無(wú)關(guān)(P＞0.05)；無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組結(jié)直腸癌原發(fā)灶中Kiss1基因陽(yáng)性表達(dá)率為71.67％，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組為52.46％，二組之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；無(wú)遠(yuǎn)處器官轉(zhuǎn)移組結(jié)直腸癌原發(fā)灶中Kiss1基因陽(yáng)性表達(dá)率為69.00％，遠(yuǎn)處器官轉(zhuǎn)移組為28.57

4、％，二組之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；
　　 2、Kiss1基因在結(jié)直腸癌原發(fā)灶中的陽(yáng)性表達(dá)率為52.46％，在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶為22.95％，二者之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；
　　 2、結(jié)直腸癌原發(fā)灶中受體GPR54表達(dá)水平與患者性別、年齡、病理類型、Dukes分期、分化程度、浸潤(rùn)程度、脈管內(nèi)癌栓、神經(jīng)浸潤(rùn)、淋巴管內(nèi)癌栓、腫瘤壞死、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處器官轉(zhuǎn)移均無(wú)顯著關(guān)系(P＞0.05)；
　　

5、 4、受體GPR54在結(jié)直腸癌原發(fā)灶中的陽(yáng)性表達(dá)率為82.25％，在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中為78.69％，二者之間的差異無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；
　　 5、在結(jié)直腸癌原發(fā)灶中Kiss1基因的表達(dá)和受體GPR54的表達(dá)之間無(wú)明顯相關(guān)性(r=-0.146，P＞0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組結(jié)直腸癌原發(fā)灶中Kiss1基因表達(dá)低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組結(jié)直腸癌原發(fā)灶中Kiss1基因表達(dá)低于無(wú)遠(yuǎn)

6、處轉(zhuǎn)移組，而淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中Kiss1表達(dá)亦低于其相應(yīng)原發(fā)灶，提示Kiss1基因可能與結(jié)直腸癌的轉(zhuǎn)移特性密切相關(guān)，可能具有抑制結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移的功能；
　　 2、GPR54的表達(dá)與結(jié)直腸癌的各種臨床病理特征均無(wú)明顯關(guān)系，提示GPR54可能不參與結(jié)直腸癌的惡性演進(jìn)過(guò)程；
　　 3、結(jié)直腸癌原發(fā)灶中Kiss1基因的表達(dá)與其受體GPR54的表達(dá)無(wú)明顯相關(guān)性，提示Kiss1基因在結(jié)直腸癌中所發(fā)揮的生物學(xué)作用可能并不通過(guò)其受體GPR54

7、途徑，推測(cè)有可能存在其他受體途徑。
　　 第二部分原代人結(jié)直腸癌裸鼠肝轉(zhuǎn)移模型的建立及其與KiSS1基因的關(guān)系
　　 目的：
　　 1、建立Kiss1基因陽(yáng)性和陰性表達(dá)的原代人結(jié)直腸癌裸鼠皮下移植瘤模型、盲腸原位移植瘤模型(肝轉(zhuǎn)移模型)；
　　 2、通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究，探討Kiss1基因與結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移等生物學(xué)特性的關(guān)系。
　　 方法：
　　 1、選擇17個(gè)Kiss1基因陽(yáng)性的人結(jié)直腸癌標(biāo)本和

8、9個(gè)陰性表達(dá)的人結(jié)直腸癌標(biāo)本，分別種植于裸鼠皮下；選擇生長(zhǎng)良好的Kiss1基因陽(yáng)性和陰性表達(dá)的第一代裸鼠皮下移植瘤各一例，再次接種于裸鼠皮下和盲腸漿膜下；然后再選擇生長(zhǎng)良好的Kiss1基因陽(yáng)性和陰性表達(dá)的第二代裸鼠皮下移植瘤各一例，接種于裸鼠盲腸漿膜下，建立盲腸原位移植瘤模型(肝轉(zhuǎn)移模型)；
　　 2、觀察各代移植瘤的生長(zhǎng)和肝轉(zhuǎn)移情況，分析其與Kiss1基因的關(guān)系。
　　 結(jié)果：
　　 1、成功建立了Kiss1基

9、因陽(yáng)性和陰性表達(dá)的原代人結(jié)直腸癌裸鼠皮下移植瘤模型、盲腸原位移植瘤模型(肝轉(zhuǎn)移模型)；皮下移植瘤、盲腸原位移植瘤與原代結(jié)直腸癌組織結(jié)構(gòu)相似;
　　 2、原代人結(jié)直腸癌裸鼠皮下移植瘤動(dòng)物模型建立過(guò)程中，第一代成功率為30.77％(8/26)，第二代為68.75％(11/16)，二者之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；第二代皮下移植瘤生長(zhǎng)潛伏期較第一代明顯縮短，其中第二代皮下移植瘤中Kiss1基因陰性表達(dá)者生長(zhǎng)潛伏期較Kiss1

10、陽(yáng)性者短，且Kiss1基因陰性表達(dá)者移植瘤的體積較陽(yáng)性者大，Kiss1基因陰性表達(dá)者裸鼠皮下移植瘤成功率明顯高于Kiss1基因陽(yáng)性者，二者之間的差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；
　　 3、第二代盲腸原位移植瘤成功率為41.67％(7/16)，其中Kiss1基因陽(yáng)性組成功率為12.25％(1/8)，Kiss1基因陰性組成功率75.00％(6/8)；第三代為75.00％(24/32)，其中Kiss1基因陰性組成功率為93.75

11、％(15/16)，Kiss1基因陽(yáng)性組成功率為56.25％(9/16)；Kiss1基因陰性組成功率均明顯高于Kiss1陽(yáng)性組，二者之間的差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；
　　 4、第二代盲腸原位移植瘤肝轉(zhuǎn)移率為28.57％(2/7)，第三代盲腸原位移植瘤肝轉(zhuǎn)移率為62.50％(15/24)，兩組之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；第二代盲腸原位移植瘤模型中成功出現(xiàn)肝轉(zhuǎn)移者均為Kiss1基因陰性表達(dá)；第三代盲腸原位移植

12、瘤模型中Kiss1基因陰性組肝轉(zhuǎn)移率80.00％(12/15)，Kiss1基因陽(yáng)性組為33.33％(3/9)，二組之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1、成功建立了人結(jié)直腸癌裸鼠皮下移植瘤、盲腸原位移植瘤模型(肝轉(zhuǎn)移模型)；
　　 2、隨原代結(jié)直腸癌傳代次數(shù)的增加，裸鼠移植瘤模型的成功率逐漸增高；
　　 3、第二代皮下移植瘤及第二、第三代盲腸原位移植瘤中，Kiss1基因陰性表達(dá)