結(jié)直腸癌發(fā)生相關(guān)候選基因的篩選及其在淋巴轉(zhuǎn)移中的作用研究.pdf

1、[目的]：
　　1.檢測結(jié)直腸癌病人標本中染色體位點上特異性腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān)候選基因SNPs以及CNVs，并分析其與結(jié)直腸癌淋巴轉(zhuǎn)移等相關(guān)臨床參數(shù)的關(guān)系。
　　2.檢測4號染色體上特異性腫瘤相關(guān)候選基因(VEGFC、CCNA2、IL2、ABCG2、EGF、NFKB1)mRNA表達量，并分析其在結(jié)直腸癌病人淋巴轉(zhuǎn)移等相關(guān)病理參數(shù)中的作用。
　　3.篩選出特異性結(jié)直腸癌淋巴轉(zhuǎn)移的腫瘤基因標志物，為結(jié)直腸癌病人淋巴轉(zhuǎn)移的臨床

2、檢測，預(yù)測預(yù)后，干預(yù)和指導治療提供科學依據(jù)。
　　[方法]：
　　1.目標區(qū)域外顯子測序捕獲25例結(jié)直腸癌病人的癌組織和癌旁正常組織的腫瘤相關(guān)基因，生物信息學和統(tǒng)計學分析與結(jié)直腸癌病人淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān)的SNPs。
　　2.目標區(qū)域外顯子測序捕獲25例結(jié)直腸癌病人的癌組織和癌旁正常組織的腫瘤相關(guān)基因，生物信息學和統(tǒng)計學分析與結(jié)直腸癌病人淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān)的CNVs。
　　3.RT-PCR分別檢測39例結(jié)直腸癌病人的癌組織和癌

3、旁正常組織中VEGFC、CCNA2、IL2、ABC G2、EGF、NFKB1基因的mRNA表達量;統(tǒng)計分析這6個基因的mRNA表達在癌組織和癌旁正常組織中有無差異。
　　4.RT-PCR分別檢測39例結(jié)直腸癌病人的癌組織和癌旁正常組織中VEGFC、CCNA2、IL2、ABC G2、EGF、NFKB1基因的mRNA表達量;統(tǒng)計分析這6個基因的mRNA表達量與結(jié)直腸癌病人淋巴轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系。
　　5.RT-PCR分別檢測39例結(jié)

4、直腸癌病人的癌組織和癌旁正常組織中VEGFC、CCNA2、IL2、ABCG2、EGF、NFKB1基因的mRNA表達量;統(tǒng)計分析這6個基因的mRNA表達量與結(jié)直腸癌病人的年齡、性別、臨床分期等臨床參數(shù)之間的關(guān)系。
　　[結(jié)果]：
　　1.SLC28A3、BRCA1、RRM2、PMS2、CDA、 EPHX1、RALY、 CD33、 BCL10、ETV1基因的SNPs在淋巴轉(zhuǎn)移組中的頻率比未轉(zhuǎn)移組中的高，與結(jié)直腸癌病人的淋巴轉(zhuǎn)移呈

5、正相關(guān)性且具有統(tǒng)計學差異(P＜0.05); MST1 R、KMT2B、BCL2、LSM3、TTF1、MAP3K1基因的SNPs在淋巴轉(zhuǎn)移組中的頻率比未轉(zhuǎn)移組中的低，與結(jié)直腸癌病人的淋巴轉(zhuǎn)移呈負相關(guān)性，且具有統(tǒng)計學差異性(P＜0.05）。
　　2.DDR1、CYP21A2、SULT1 A1、XRCC2、POU5F1、FLT1基因的CNVs在淋巴轉(zhuǎn)移組和未轉(zhuǎn)移組均未見明顯差異(P＞0.05）;其中DDR1基因缺失的頻率在淋巴轉(zhuǎn)移組高于

6、未轉(zhuǎn)移組且接近有統(tǒng)計學意義(P=0.072)。
　　3.與癌旁正常組織相比，ABCG2和NFKB1基因mRNA表達量在癌組織中分別降低和升高，且差別具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05); VEGFC、CCNA2、IL2、EGF基因mRNA表達量在癌組織和癌旁正常組織無顯著差別(P＞0.05）。
　　4.與淋巴未轉(zhuǎn)移組相比，EGF和NFKB1基因的mRNA表達量在淋巴轉(zhuǎn)移組中降低，且差別具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）。VEGFC、C

7、CNA2、IL2和ABCG2基因的mRNA表達量在淋巴轉(zhuǎn)移和未轉(zhuǎn)移組病人中無明顯差別(P＞0.05）。
　　5.CCNA2基因mRNA表達量在高年齡組（＞60歲）中表達量高于低年齡組（≤60歲）(P＜0.05); IL2基因表達量在遠處轉(zhuǎn)移組中顯著高于未轉(zhuǎn)移組(P＜0.05）;NFKB1基因表達量在中晚期組(Ⅲ-Ⅳ期)顯著低于早期組（Ⅰ-Ⅱ期）(P＜0.05）。VEGFC、CCNA2、IL2、ABCG2、EGF、NFKB1基因與其

8、他臨床參數(shù)未見明顯相關(guān)(P＞0.05）。
　　[結(jié)論]：
　　1.SLC28A3、BRCA1、RRM2、PMS2、CDA、EPHX1、RALY、CD33、 BCL10、ETV1、MST1 R、KMT2B、BCL2、LSM3、TTF1、MAP3K1基因的SNPs與結(jié)直腸癌的淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān)，可以作為潛在的預(yù)測指標。為結(jié)直腸癌病人淋巴轉(zhuǎn)移的臨床檢測，預(yù)測預(yù)后，干預(yù)和指導治療提供科學依據(jù)。
　　2.ABCG2和NFKB1基因的表