BEX2基因在結(jié)直腸癌增殖和轉(zhuǎn)移中的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、研究目的：
　　Bex2(Brain expressed X-linked protein2)蛋白屬于IDPs(Instrinsically DisorderedProteins)，包含128個(gè)氨基酸，在細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)、周期、增殖等信號(hào)通路中發(fā)揮著重要作用。近年來，有研究報(bào)道BEX2與腫瘤發(fā)生有密切關(guān)系，且在不同類型的腫瘤中發(fā)揮不同的功能。目前BEX2在結(jié)直腸癌組織中的功能如何尚未見報(bào)道。深入探討B(tài)EX2在結(jié)直腸癌中的功能和機(jī)制不

2、僅可進(jìn)一步探究結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展中遺傳學(xué)特征，也可為治療結(jié)直腸癌提供新的靶點(diǎn)。
　　研究方法：
　　本課題從公共數(shù)據(jù)庫GEO（Gene Expression Omnibus）采集GSE14333數(shù)據(jù)庫中結(jié)直腸癌組織的BEX2的表達(dá)水平，分析其與結(jié)直腸癌臨床分期的相關(guān)性，并利用定量PCR檢測(cè)34例新鮮結(jié)直腸癌組織中的BEX2表達(dá)，驗(yàn)證BEX2與臨床分期的關(guān)系。利用細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、克隆形成實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞遷徙遷移實(shí)驗(yàn)、動(dòng)物致瘤能力實(shí)驗(yàn)和動(dòng)

3、物體內(nèi)肝轉(zhuǎn)移模型驗(yàn)證BEX2對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞的影響。同時(shí)，結(jié)合生物信息學(xué)分析、蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)、基因芯片技術(shù)等探索BEX2的可能下游調(diào)控機(jī)制。
　　研究結(jié)果：
　　我們第一次分析了BEX2表達(dá)水平與結(jié)直腸癌分期的關(guān)系，首次發(fā)現(xiàn)BEX2的表達(dá)與結(jié)直腸癌的TNM分期呈正相關(guān)。體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)證實(shí)BEX2敲除后能明顯抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖，克隆形成能力和致瘤能力。BEX2敲除后MAPK通路中的JNK和c-Jun的磷酸化表達(dá)減弱，而Erk及p

4、-38未發(fā)生改變。而在非沉默BEX2細(xì)胞中加入JNK選擇性抑制劑SP600125后生長(zhǎng)得到顯著抑制，且生長(zhǎng)受抑制程度和BEX2敲除組類似;同時(shí)，我們發(fā)現(xiàn)BEX2敲除后能明顯抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞發(fā)生遷移，盲腸原位肝轉(zhuǎn)移模型和半脾肝轉(zhuǎn)移模型結(jié)果均提示BEX2敲除后能顯著延長(zhǎng)BEX2敲除組肝轉(zhuǎn)移模型老鼠的生存時(shí)間，且該過程是非EMT依賴的，高通量芯片比較BEX2敲除前后的基因差異，提示與MMP家族基因改變相關(guān)。
　　研究結(jié)論：
　　B

5、EX2在不同類型的腫瘤中發(fā)揮不同的功能，而BEX2在結(jié)直腸癌中的研究尚未報(bào)道。深入探討B(tài)EX2在結(jié)直腸癌中的功能和機(jī)制研究有助于進(jìn)一步明確結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制，從為基因治療提供了新的靶點(diǎn)。
　　1.本文利用系統(tǒng)生物學(xué)分析提取了GEO數(shù)據(jù)庫中數(shù)據(jù)，并用大量結(jié)直腸癌新鮮組織樣本中驗(yàn)證了BEX2表達(dá)水平和結(jié)直腸癌臨床病理特征，第一次發(fā)現(xiàn)BEX2的表達(dá)水平與結(jié)直腸癌TNM分期呈明顯正相關(guān)。
　　2.本文構(gòu)建了BEX2基因敲除細(xì)