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文檔簡介
1、目的:通過采用單側(cè)輸尿管結(jié)扎(UUO)制作大鼠腎小管間質(zhì)纖維化模型,觀察各組UUO大鼠梗阻側(cè)腎組織小管間質(zhì)血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、血管生成素-1(Ang-1)以及血管生成素-2(Ang-2)表達的變化,探討化瘀通絡(luò)中藥大黃()蟲丸對腎小管間質(zhì)微血管的影響及其作用機制,以期為臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。
腎臟微血管結(jié)構(gòu)的破壞和缺失,特別是腎小管周圍毛細血管(peritubular capillaries,PTC)的破壞、丟失,在
2、各種腎臟疾病進程中的作用近年極受關(guān)注。腎小管間質(zhì)纖維化是各種進展性腎臟疾病的共同通路,它的發(fā)生與PTC的破壞和缺失密切聯(lián)系。探討腎小管間質(zhì)纖維化的發(fā)生發(fā)展機制,防止和延緩腎小管間質(zhì)纖維化,成為防治慢性腎臟病進展的關(guān)鍵問題之一。因此,從PTC破壞和缺失的角度開展相關(guān)研究,具有十分重要的意義。UUO是目前研究腎小管間質(zhì)纖維化的理想模型,可以反映人類梗阻性腎病和纖維化腎臟疾病的過程,因而我們選取此種模型進行本研究。
腎小管間質(zhì)纖維化
3、是各種慢性腎臟疾病遷延不愈,最終均導(dǎo)致慢性腎功能衰竭的共同病理基礎(chǔ)。慢性腎臟疾病腎功能衰竭屬中醫(yī)“水腫”“關(guān)格”“癃閉”等病證的范圍,近兩年也有醫(yī)家[1]根據(jù)RIF的ECM過度積聚和成纖維細胞增殖的病理特點認為它與中醫(yī)的癥積相類似。漢代醫(yī)家張仲景《金匱要略·水氣病脈證并治第十四》篇提出“血不利則為水”,強調(diào)血行不暢及瘀血在水氣病形成中的重要地位和作用,為后世歷代醫(yī)家所重視,同時,慢性腎臟疾病腎功能衰竭是慢性久病,“久病入絡(luò)”,“久病必瘀
4、”是其基本病機之一,活血化瘀、祛瘀生新是中醫(yī)治療慢性腎臟疾病腎功能衰竭的重要治法。大黃(庶蟲)蟲丸即出自張仲景《金匱要略·血痹虛勞病脈證并治第六》,該方能夠化瘀通絡(luò)、祛瘀生新,是臨床用于治療該病的常用方劑之一。
本實驗應(yīng)用UUO大鼠復(fù)制腎小管間質(zhì)纖維化模型,同時予大黃(庶蟲)蟲丸治療,纈沙坦對照,觀察UUO大鼠腎臟腎小管間質(zhì)血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、血管生成素-1(Ang-1)以及血管生成素-2(Ang-2)等各項指標(biāo)的變
5、化,探討大黃()蟲丸對UUO大鼠的作用機制,為大黃(庶蟲)蟲丸更好的應(yīng)用于臨床提供理論依據(jù)。
方法:
1選用健康清潔級雌性SD大鼠50只,體重170±10g,適應(yīng)性喂養(yǎng)一周,測尿蛋白陰性后,逐一稱重按重量標(biāo)號,按照隨機分配的原則分為5組,每組10只:假手術(shù)組(Shamp group,S)、模型組(Model group,M)、纈沙坦組(Valsartan group,Ⅴ)、大黃(庶蟲)蟲丸中劑量組(DHZCM gro
6、up,DM)、大黃()蟲丸高劑量組(DHZCH group,DH)。其中除S組外,其余各組均行左側(cè)輸尿管結(jié)扎,構(gòu)建UUO大鼠模型。
2實驗給藥:根據(jù)人用藥量與實驗動物用藥劑量的換算公式,計算出大鼠的用藥量。五組均喂普通飼料,S、M組灌胃蒸餾水(10ml·kg-1·d-1);其余三組分別給予纈沙坦(10mg·kg-1·d-1)、大黃()蟲丸水溶液中劑量(3g·kg-1·d-1)、大黃()蟲丸水溶液高劑量(6g·kg-1·d-1)
7、灌胃。每日治療1次,連續(xù)治療14天。實驗周期共2周。
3指標(biāo)檢測:于實驗結(jié)束前一天稱重后將大鼠置于代謝籠中,正常飲水禁食下收集24 h尿液,測24 h尿量及24 h尿蛋白定量;實驗結(jié)束時斷頭取血,用于檢測血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN),并計算肌酐清除率(Ccr);取左側(cè)部分腎臟組織迅速置于4%多聚甲醛液中固定,脫水,石蠟包埋,行HE、Masson染色,用于光鏡下觀察腎臟皮質(zhì)區(qū)及皮髓交界區(qū)腎小管及間質(zhì)的結(jié)構(gòu)和變化及免疫組化法
8、檢測腎組織血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、以及血管生成素-1(Ang-1)、血管生成素-2(Ang-2)的表達。
結(jié)果:
1一般情況及24h尿蛋白定量檢測結(jié)果
假手術(shù)組大鼠精神狀況、毛發(fā)、活動、飲食、飲水等無明顯改變;模型組大鼠被毛松弛紊亂,毛色差,厭食,懶動;纈沙坦組與大黃()蟲丸中劑量組、大黃()蟲丸高劑量組大鼠飲食、體重、活動情況等整體狀況均較模型組有所改善。各組間24h,尿蛋白定量比較無明顯差異(P>
9、0.05)。
2各組大鼠腎功能檢測結(jié)果
BUN測定結(jié)果,與假手術(shù)組比較,模型組大鼠BUN水平明顯升高(P<0.01)。與模型組相比,纈沙坦組、大黃(庶蟲)蟲丸中劑量組和大黃()蟲丸高劑量組大鼠BUN水平下降有顯著性差異(均為P<0.01)。與纈沙坦組比較,大黃()蟲丸中劑量組、大黃()蟲丸高劑量組大鼠BUN水平下降有顯著性差異(均為P<0.01)。但大黃()蟲丸中劑量組和大黃()蟲丸高劑量組之間無明顯差異(P>0.0
10、5)。
Scr測定結(jié)果,與假手術(shù)組比較,模型組Scr水平明顯升高(P<0.01)。與模型組相比,纈沙坦組、大黃()蟲丸中劑量組和大黃廑蟲丸高劑量組Scr水平下降有顯著性差異(均為P<0.01)。纈沙坦組與大黃()蟲丸中劑量組、大黃()蟲丸高劑量組比較Scr水平下降有顯著性差異(均為P<0.01),大黃()蟲丸高劑量組較大黃()蟲丸中劑量組Scr水平下降有顯著性差異(P<0.01)。
各組間Ccr比較無明顯差異(P>0
11、.05)。
3光鏡下腎組織病理形態(tài)學(xué)觀察
假手術(shù)組腎組織未見病理改變;模型組HE染色可見腎皮質(zhì)變薄,腎小管上皮細胞腫脹,部分壞死脫落,部分腎小管呈灶狀萎縮,管腔擴張,間質(zhì)明顯增寬,間質(zhì)內(nèi)可見大量炎性細胞浸潤;Masson染色可見增寬的間質(zhì)區(qū)大量膠原纖維增生,間質(zhì)纖維化呈灶狀分布;大黃()蟲丸中、高劑量組和纈沙坦組HE和Masson染色腎小管和腎間質(zhì)病理改變較模型組明顯改善,腎小管較少萎縮、管腔輕度擴張,上皮細胞壞死脫
12、落較少,腎間質(zhì)增寬較輕、少量炎性細胞浸潤。
4免疫組化檢測VEGF、Ang-1及Ang-2的表達
VEGF測定結(jié)果,假手術(shù)組VEGF主要在腎小管上皮細胞及腎小球臟層上皮細胞表達,部分小管周圍細胞也有表達;模型組除上述部位表達外,腎小球系膜細胞有少量VEGF表達,而且腎間質(zhì)VEGF表達顯著下降(P<0.01)。纈紗坦組、大黃()蟲丸高劑量組表達較模型組明顯增強(均為P<0.01),大黃()蟲丸中劑量組與模型組相比無明顯
13、差異(P>0.05),三個治療組之間無明顯差異(P>0.05)。
Ang-1測定結(jié)果,假手術(shù)組主要表達于腎小管上皮細胞,模型組表達明顯減弱(P<0.001),纈紗坦組及大黃()蟲丸中劑量組、大黃()蟲丸高劑量組較模型組表達明顯增強(P<0.05,P<0.05,P<0.001),大黃()蟲丸高劑量組優(yōu)于纈沙坦組和大黃()蟲丸中劑量組(P<0.05),纈沙坦組和大黃()蟲丸中劑量組之間無明顯差異(P>0.05)。
Ang
14、-2測定結(jié)果,假手術(shù)組主要表達于腎小管上皮細胞,模型組表達明顯減弱(P<0.01),纈紗坦組及大黃()蟲丸中劑量組、大黃()蟲丸高劑量組較模型組表達明顯增強(均為P<0.05),且三組之間無明顯差異(P>0.05)。
結(jié)論:
1大黃(庶蟲)蟲丸可以降低UUO致腎間質(zhì)纖維化大鼠血BUN、Scr水平,對腎功能有一定保護作用。
2通過增加腎組織中VEGF、Ang-1及Ang-2的表達水平,保護腎小管周圍毛細血管內(nèi)
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