2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、豬鏈球菌(Streptococcus suis,S.suis)是一種重要的人畜共患病原性細菌,人感染豬鏈球菌后引起腦膜炎、關節(jié)炎、心肌炎,甚至導致休克死亡。1998年和2005年在我國發(fā)生的兩次豬鏈球菌疫情中鏈球菌中毒性休克綜合征的發(fā)病率明顯高于世界其它國家。目前,豬溶素(Suilysin,SLY)是豬鏈球菌唯一已知的分泌性蛋白質(zhì)毒素,與人發(fā)生鏈球菌中毒性休克綜合征有關,它能裂解紅細胞、刺激巨噬細胞釋放大量炎性細胞因子,也能引起實驗動物

2、產(chǎn)生強烈的炎癥反應。豬溶素也是一種保護性抗原,基因修飾的無毒突變子能刺激小鼠產(chǎn)生免疫保護作用。豬溶素屬于膽固醇依賴性細胞裂解毒素(Cholesterol dependent cytolysins,CDCs),具有CDCs分子的典型晶體結(jié)構。
  CDCs分子以產(chǎn)氣莢膜梭菌溶血素O為原型毒素。長期以來,學界認為CDCs分子結(jié)合到細胞膜表面的膽固醇后自動寡聚化形成環(huán)狀復合物,繼而以打孔的方式裂解細胞。但近年來對Intermedilys

3、in(ILY)、Vaginolysin(VLY)及Pneumolysin(PLY)與細胞的相互作用研究打破了膽固醇是CDCs唯一受體的論斷。研究發(fā)現(xiàn)ILY、VLY特異性結(jié)合人CD59分子,PLY與Lewis X有較高的親和力,Kd值為1.88×10-5M。
  由于SLYP353L突變子不能裂解紅細胞而是凝集紅細胞,而且膽固醇不能完全阻斷SLYP353L與紅細胞膜的結(jié)合,說明SLY可能與ILY、VLY等CDCs分子相似,與紅細胞間

4、存在多個結(jié)合位點。本研究分析了單糖與SLY的相互作用,并對仔豬進行rSLYP353L亞單位疫苗免疫,結(jié)果如下:
  1. rSLY、rSLYP353L在紅細胞膜上有不同的存在形式
  將rSLY,rSLYP353L與紅細胞懸液孵育后,收集經(jīng)rSLY裂解的紅細胞膜碎片、rSLYP353L凝集的紅細胞用低滲緩沖液處理后收集膜碎片。將rSLY-膜復合物、rSLYP353L-膜復合物經(jīng)SDS—AGE凝膠電泳后進行蛋白質(zhì)免疫印跡檢測(

5、一抗為兔抗rSLYP353L IgG),結(jié)果顯示,rSLY在紅細胞膜上以單體、二聚體及寡聚體形式存在,而rSLYP353L在紅細胞膜上僅存在單體形式。
  2.單糖對rSLY、rSLYP353L活性的影響
  分析上述實驗結(jié)果并查閱其它文獻資料,初步推測SLY可能結(jié)合紅細胞表面除膽固醇外的其它受體分子,特別是糖基化受體。用巖藻糖、甘露糖、葡萄糖進行阻斷試驗,結(jié)果表明,278mmol/L的三種糖溶液能夠阻斷2HAU rSLYP

6、353L的凝血活性和2HU rSLY的溶血活性;當糖濃度低于139mmol/L時,只有巖藻糖溶液有阻斷作用;當糖濃度低于70mmol/L時三種糖溶液均無阻斷作用。278mmol/L的三種糖溶液均不能阻斷16HAU rSLYP353L的凝血活性和16HU rSLY的溶血活性。因此,巖藻糖溶液的阻斷作用最強。用巖藻糖苷酶水解紅細胞膜表面的巖藻糖殘基后,rSLYP353L的凝血活性降低2倍,rSLY的溶血活性也有所降低。
  3.巖藻糖

7、對rSLY、rSLYP353L與紅細胞膜結(jié)合作用的影響
  將rSLY、rSLYP353L分別與膽固醇溶液、巖藻糖溶液、膽固醇和巖藻糖混合溶液孵育30min后,加入2%的紅細胞懸液,再孵育1h。收集紅細胞并洗滌,經(jīng)低滲緩沖液裂解后,收集rSLY-膜復合物、rSLYP353L-膜復合,經(jīng)SDS—PAGE電泳及蛋白質(zhì)免疫印跡檢測,結(jié)果發(fā)現(xiàn):膽固醇能完全阻斷rSLYP353L凝血活性,少量rSLYP353L依然可以結(jié)合到紅細胞膜上,但結(jié)

8、合量少于巖藻糖阻斷組;膽固醇與巖藻糖阻斷組中紅細胞膜上未檢測到rSLYP353L。對于rSLY有相似的結(jié)果,但巖藻糖難以完全阻斷其溶血活性。
  4.非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳測定rSLY、rSLYP353L與單糖的親和力
  制備含巖藻糖、甘露糖、葡萄糖的非變性聚丙烯酰胺凝膠(凝膠濃度12%,單糖濃度110mmol/L),rSLY、rSLYP353L樣品在冰水混合物浴下電泳,以不含糖的非變性膠為對照。測定rSLY、rSLYP

9、353L在非變性凝膠中的遷移距離,計算遷移率。結(jié)果表明rSLY、rSLYP353L在含有巖藻糖的凝膠中遷移率分別降低1.7%和2.7%;rSLY在含有甘露糖和葡萄糖的凝膠中遷移率均降低了1%,rSLYP353L均未降低。
  5.預測rSLYP353L與巖藻糖相互作用的位點
  通過NCBI和ZINC獲取rSLYP353L與巖藻糖的晶體結(jié)構數(shù)據(jù),利用CLC Drug Discovery Workbench2計算可知rSLYP

10、353L存在9個可能的Binding pockets,與L-fucose晶體結(jié)構比對后所最高得分值為93.2%。巖藻糖最佳結(jié)合位點可能是在rSLYP353L的第一結(jié)構域,通過與Tyr98,Pro99和Val150形成氫鍵結(jié)合到rSLYP353L分子上。
  6.仔豬免疫的免疫試驗
  以氫氧化鋁凝膠為佐劑制備rSLYP353L亞單位疫苗,分三組進行免疫接種試驗:每次接種含50μg rSLYP353L的疫苗,接種兩次;每次接種

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