β1，4-半乳糖基轉(zhuǎn)移酶1基因調(diào)控的研究.pdf

1、β1,4-半乳糖基轉(zhuǎn)移酶1(beta-1,4 galactosyltransferase;EC 2.4.1.38)(簡稱β1,4GT1)是最早被克隆的一種糖基轉(zhuǎn)移酶.和其它糖基轉(zhuǎn)移酶相比,β1,4GT1的特別之處在于它既能定位于高爾基體催化Galβ1→4GlcNAC糖苷鍵形成,參與糖復(fù)合物的合成,又能定位于細(xì)胞表面,作為一種細(xì)胞粘附分子參與細(xì)胞與基質(zhì)之間和細(xì)胞與細(xì)胞之間的相互作用,而且細(xì)胞表面的β1,4GT1作為一種重要的粘附分子,在腫

2、瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移過程中也發(fā)揮著重要的作用.由于β1,4GT1在基因的調(diào)控區(qū)域富含與SP1結(jié)合的GC盒,故其被認(rèn)為是一種管家基因,但對其具體的調(diào)控機制始終缺乏深入的研究.近年來的研究表明,β1,4GT1 mRNA的轉(zhuǎn)錄受細(xì)胞周期的影響,而且我們最近的研究還發(fā)現(xiàn),β1,4GT1與放線菌酮誘導(dǎo)的SMMC-7721肝癌細(xì)胞的凋亡有關(guān),這使我們對β1,4GT1在細(xì)胞周期、腫瘤轉(zhuǎn)移以及凋亡過程中的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制產(chǎn)生了濃厚的興趣.鑒于對于小鼠β1,4

3、GT1的轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究并未發(fā)現(xiàn)上述相關(guān)的調(diào)控元件,而且對人的β1,4GT1的調(diào)控研究也急需深入,在此我們采用篩選λ噬菌體Genomic文庫和PCR的方法克隆了人β1,4GT1的5'調(diào)控區(qū)域,將其克隆到Luciferase報導(dǎo)基因的載體中,并構(gòu)建了β1,4GT1 5'調(diào)控區(qū)域的一系列缺失突變體,分別研究了β1,4GT1在細(xì)胞周期、腫瘤轉(zhuǎn)移以及凋亡過程中的轉(zhuǎn)錄調(diào)控.PKB/Akt是PI3K信號通路下游的重要的抗凋亡蛋白,Gag-PKB是一種持

4、續(xù)激活型PKB/Akt.我們發(fā)現(xiàn),Gag-PKB穩(wěn)定轉(zhuǎn)染SMMC-7721細(xì)胞后,能明顯下調(diào)由于細(xì)胞非貼壁狀態(tài)懸浮生長所誘發(fā)的失巢凋亡的比率,同時Gag-PKB能降低β1,4GT1的啟動子活性,并且共轉(zhuǎn)染的Gag-PKB的表達質(zhì)粒越多,β1,4GT1啟動子活性的抑制越明顯.提示我們要更多的關(guān)注β1,4GT1與凋亡的聯(lián)系.我們的研究發(fā)現(xiàn),-571~+52bp中幾個潛在的NF-κB的結(jié)合位點,Gag-PKB可能通過類似的轉(zhuǎn)錄因子來抑制β1,