4種中藥提取物體對(duì)抗白色念珠菌的敏感性研究.pdf

1、背景:念珠菌是正常人口腔、消化道及陰道黏膜中常見(jiàn)的寄生菌,屬于條件致病性真菌。近年來(lái),由于廣譜抗生素、免疫抑制劑、細(xì)胞毒藥物的廣泛應(yīng)用,使得念珠菌感染的發(fā)生率不斷上升。大量研究表明,許多口腔黏膜病的發(fā)生都與念珠菌感染有關(guān),尤其是白色念珠菌。雖然抗真菌藥物氟康唑具有毒性小,抗真菌譜廣、口服吸收迅速完全,血腦屏障通透性高等特點(diǎn),但此類唑類抗念珠菌藥物的廣泛使用使念珠菌耐藥現(xiàn)象日趨嚴(yán)重,而且目前臨床上常用的抗真菌藥物在高效低毒、抗真菌譜和耐藥

2、性方面的評(píng)價(jià)尚不能令人滿意,因此從中草藥中尋求抗真菌新藥已成為非常重要的研究?jī)?nèi)容。中藥抗真菌劑來(lái)源廣泛,毒性小,具有廣譜性且藥效長(zhǎng),在真菌細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生多方面藥理效應(yīng),作用途徑多樣化,使抗念珠菌中藥的研究成為熱點(diǎn)。
　　 目的:測(cè)定中藥丹皮酚、丁香酚、土槿乙酸、鹽酸小檗堿體外抗白色念珠菌的敏感性,篩選出抗口腔念珠菌感染作用較強(qiáng)的單味中藥,尋找來(lái)源廣泛,毒副作用小,價(jià)格低廉的中藥,為治療口腔念珠菌感染的新藥開(kāi)發(fā)提供線索思路。
　

3、　 方法:參照美國(guó)國(guó)家臨床試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)(NCCLS)提出的標(biāo)準(zhǔn),用微量稀釋法分別檢測(cè)丹皮酚、丁香酚、土槿乙酸、鹽酸小檗堿對(duì)27株口腔白色念珠菌分離株和1株標(biāo)準(zhǔn)株ATCC90028的最小抑菌濃度,以氟康唑作為質(zhì)控藥物,ATCC90028做質(zhì)控菌株,控制實(shí)驗(yàn)條件。用棉拭涂擦法收集樣本,含有孢子和假菌絲的樣本接種于沙氏瓊脂培養(yǎng)基上,37℃培養(yǎng)48小時(shí)。將菌種轉(zhuǎn)種子科瑪嘉顯色培養(yǎng)基上,37℃培養(yǎng)48小時(shí),根據(jù)培養(yǎng)基上形成菌落的不同顏色來(lái)判斷

4、念珠菌菌種。取有蓋的96孔板,將倍比稀釋的藥液由高到低的濃度加入96孔板中,每行1-10孔加入藥液100μl,11孔加入RPMI1640液體培養(yǎng)基100μl(不含藥液)作為陽(yáng)性對(duì)照,12孔加入RPMI1640液體培養(yǎng)基200μl(不含藥液)作為陰性對(duì)照。在1-11孔中加入菌懸液100μl。每種菌株做一行復(fù)孔,平行操作一次。另取一塊板用氟康唑及ATCC90028做質(zhì)量控制。將制備好的培養(yǎng)板放入35℃電熱恒溫培養(yǎng)箱中濕盒孵育48h。

5、　　 結(jié)果:1.氟康唑?qū)TCC90028的MIC值為0.25μg/ml,此結(jié)果符合NCCLSM27-A2規(guī)定的MIC值。從而保證了整個(gè)實(shí)驗(yàn)的科學(xué)性,證實(shí)了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性和可重復(fù)性。2.丹皮酚白色念珠菌的MIC值為125.00μg/ml-1000.00μg/ml;丁香酚對(duì)白色念珠菌的MIC值為199.50μg/ml-399.00μg/ml;土槿乙酸對(duì)白色念珠菌的MIC值為32.00μg/ml-1024.00μg/ml;鹽酸小檗堿對(duì)白

6、色念珠菌的MIC值為2.50μg/ml-10.00μg/ml。3.除了丁香酚組與土槿乙酸組比較,P=0.202(＞0.05),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外,其余藥物兩兩比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論:1.NCCLS推薦的M27-A2微量稀釋法結(jié)果穩(wěn)定、重復(fù)性好,操作簡(jiǎn)便,所需的培養(yǎng)基和試劑少,適用于抗口腔念珠菌病藥物的篩選。2.丹皮酚、丁香酚、土槿乙酸、鹽酸小檗堿對(duì)27株白色念珠菌均有抑菌的作用,其中,鹽酸小檗堿的抑菌作用最強(qiáng),其