乳鐵蛋白免疫復(fù)合物對(duì)人替代活化型巨噬細(xì)胞的逆向極化作用及其機(jī)制研究.pdf

1、乳鐵蛋白(Lactoferrin，LTF)是一種80kDa的可溶性的鐵結(jié)合糖蛋白，屬于轉(zhuǎn)鐵蛋白家族，主要存在于哺乳動(dòng)物的各種外分泌液中，乳汁中的含量最高。乳鐵蛋白能夠調(diào)節(jié)鐵的吸收，同時(shí)具有抗細(xì)菌、抗真菌、抗病毒、抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)等多種生物學(xué)功能。而抗乳鐵蛋白的抗體是抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體的一種，在炎癥及某些自身免疫性疾病中抗體水平增高。我們實(shí)驗(yàn)室前期結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid Arthritis，RA)患者血清中，乳

2、鐵蛋白免疫復(fù)合物(Lactoferrin immune complex，LTF-IC)水平顯著升高，提示LTF-IC在RA的發(fā)生發(fā)展中可能發(fā)揮重要的作用。人單核細(xì)胞來源的替代活化型巨噬細(xì)胞(Alternatively activated macrophages，M2)是一類由IL-4、IL-13、IL-10等細(xì)胞因子極化的抑制性巨噬細(xì)胞，釋放IL-10、TGF-β等抑炎性細(xì)胞因子，發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)和組織修復(fù)的功能。在實(shí)驗(yàn)室前期的工作中發(fā)現(xiàn)，

3、LTF-IC可以通過細(xì)胞表面的CD14和CD32活化人的單核細(xì)胞，釋放大量的炎性細(xì)胞因子。文獻(xiàn)報(bào)道，在M2細(xì)胞表面也高表達(dá)這兩個(gè)分子，因此我們推測(cè)，LTF-IC也有可能通過與人單核細(xì)胞類似的途徑活化M2細(xì)胞，使得M2從抑制性的表型往促炎的方向轉(zhuǎn)變，從而在RA的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要的作用。
　　本研究旨在探討LTF-IC對(duì)M2細(xì)胞的極化逆轉(zhuǎn)作用，并對(duì)其分子機(jī)制進(jìn)行深入研究。首先，我們用M-CSF和IL-4體外分化了M2表型的巨噬細(xì)

4、胞，用LTF-IC刺激16小時(shí)后，檢測(cè)上清中TNF，IL-1等炎性細(xì)胞因子的分泌情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，LTF-IC能夠誘導(dǎo) M2細(xì)胞產(chǎn)生大量的炎性細(xì)胞因子，并且能夠誘導(dǎo) T細(xì)胞釋放IL-17。值得一提的是，LTF-IC處理過的M2細(xì)胞再次接受外來刺激如LPS時(shí)，會(huì)釋放更多的炎性細(xì)胞因子。除此之外，我們還檢測(cè)了復(fù)合物處理過的M2細(xì)胞的表型改變，結(jié)果發(fā)現(xiàn)CD14、CD163、CD206、SLC40A1等M2特異性的標(biāo)志分子均明顯下調(diào)，M1特異性的

5、標(biāo)志分子如CLEC5A，INHBA，ALDH1A2等則有不同程度的上調(diào)。另外，復(fù)合物處理后的M2細(xì)胞吞噬能力亦明顯降低。由此可見，LTF-IC使得M2巨噬細(xì)胞向促炎的狀態(tài)逆轉(zhuǎn)。研究了LTF-IC活化M2細(xì)胞的機(jī)制。肝素能夠阻斷LTF與其受體結(jié)合，從而阻斷LTF-IC對(duì)M2細(xì)胞的活化；且乳鐵蛋白受體CD14的阻斷型抗體也能夠顯著阻斷活化，提示LTF在LTF-IC對(duì)M2細(xì)胞的活化中起到不可或缺的作用。此外CD32(FcγRⅡ)的抗體及其下游

6、Syk的抑制劑也能夠明顯抑制 LTF-IC對(duì)M2細(xì)胞的刺激作用。通過更進(jìn)一步的抑制劑阻斷實(shí)驗(yàn)，我們發(fā)現(xiàn) LTF及 FcγRs的下游影響細(xì)胞存活的mTOR/AKT/PI3K共同通路亦參與LTF-IC對(duì)M2細(xì)胞的活化。M2細(xì)胞被LTF-IC活化后，通過活化Caspase-1通路釋放大量的IL-1β。本研究發(fā)現(xiàn)LTF-IC能夠誘導(dǎo)人單核細(xì)胞來源的M2細(xì)胞產(chǎn)生大量促炎性細(xì)胞因子，并使得M2細(xì)胞發(fā)生炎性轉(zhuǎn)換。且該活化作用通過LTF的受體及FcγR