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1、【目的】研究結(jié)核分枝桿菌CE復(fù)合物對人單核-巨噬細胞功能表型的影響及其作用的細胞信號傳導(dǎo)通路,從而發(fā)現(xiàn)結(jié)核分枝桿菌逃避巨噬細胞殺傷,造成潛伏以及慢性感染的可能機制,為結(jié)核病的防治提供新的思路。 【方法】用大腸桿菌克隆表達純化的CE復(fù)合物與單核細胞系THP-1細胞或者人血來源的單核細胞共同培養(yǎng),分別設(shè)定不同濃度的CE復(fù)合物以及不同培養(yǎng)時間,收集細胞培養(yǎng)上清以及細胞。采用ELISA法檢測CE復(fù)合物刺激人單核-巨噬細胞TNF-α、IL
2、-10、IL-12的產(chǎn)生的水平,采用流式細胞儀檢測CE復(fù)合物刺激細胞表型的變化:并且應(yīng)用各種細胞信號傳導(dǎo)通路抑制劑來發(fā)現(xiàn)CE復(fù)合物作用的細胞信號傳導(dǎo)通路。 【結(jié)果】結(jié)核分枝桿菌CE復(fù)合物能夠在共同培養(yǎng)早期(4~8h)誘導(dǎo)人單核.巨噬細胞活化,大量產(chǎn)生TNF-α:細胞信號傳導(dǎo)通路MEK1/2和P38 MAPK的選擇性抑制劑SB203580,PD98059,U0126能抑制CE的這種作用;CE復(fù)合物在早期(<18h)促進單核-巨噬細
3、胞表面抗原提呈功能分子HLA-DR,CD80,CD40的表達。但在同培養(yǎng)晚期(>48h),CE復(fù)合物則抑制單核巨噬細胞TNF-α的產(chǎn)生,抑制抗原提呈功能分子HLA-DR,CD80,CD40的表達,促進IL-10的產(chǎn)生,以及在IL-4的參與下刺激單核細胞表面大量表達樹突狀細胞特異性ICAM-3捕獲非整合素(DC-SIGN)。 【結(jié)論】CE復(fù)合物在感染早期可能通過激活細胞信號傳導(dǎo)通路MEK1/2和P38MAPK刺激單核巨噬細胞活化,
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