結(jié)核分枝桿菌蛋白標(biāo)志物的篩選.pdf

1、目的：研究分枝桿菌菌體蛋白表達(dá)，篩選特征性蛋白，研究結(jié)核分枝桿菌和非結(jié)核分枝桿菌分泌蛋白表達(dá)，篩選差異蛋白。 方法：1.培養(yǎng)分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株，滅活菌株，觀察比較滅活效果。2.提取分枝桿菌菌體蛋白，干化學(xué)法測蛋白濃度。3.表面增強(qiáng)激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜技術(shù)（SELDI-TOF-MS）檢測分枝桿菌蛋白表達(dá)，與非分枝桿菌蛋白指紋圖譜比較，篩選分枝桿菌特征性蛋白。4.重復(fù)測定20次分枝桿菌菌體蛋白標(biāo)本，評價SELDI檢測分枝桿菌菌體蛋

2、白分子量的重復(fù)性。5.提取結(jié)核分枝桿菌和非結(jié)核分枝桿菌分泌蛋白，干化學(xué)法測蛋白濃度。6.SELDI-TOF-MS技術(shù)檢測菌株分泌蛋白表達(dá)，Biomaker Wizard Software篩選差異蛋白。7.重復(fù)測定20次分枝桿菌分泌蛋白標(biāo)本，評價SELDI-TOF-MS檢測分枝桿菌分泌蛋白分子量的重復(fù)性。 結(jié)果：1.60℃，90 min滅活后有2株菌株7天后生長，而100℃，30 min滅活后所有菌株45天均未見生長。60℃，90

3、min和100℃，30 min滅活后未生長的菌株菌體蛋白和分泌蛋白表達(dá)經(jīng)SELDI-TOF-MS檢測無差異。2.分枝桿菌菌體蛋白指紋圖譜顯示恥垢分枝桿菌ATCC14468有約20個蛋白峰，結(jié)核分枝桿菌ATCC25177、土地分枝桿菌ATCC15755、胞內(nèi)分枝桿菌ATCC13950、恥垢分枝桿菌ATCC607共有近40個蛋白峰。其中4個蛋白峰在所有分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株均表達(dá)。同時分析其它細(xì)菌（大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、銅綠假

4、單胞菌等）蛋白指紋圖譜中未見這4個蛋白峰。3.重復(fù)檢測20次，分枝桿菌菌體蛋白4個特征性蛋白峰的分子量變異系數(shù)均小于0.05％。4.分枝桿菌分泌蛋白指紋圖譜顯示結(jié)核分枝桿菌ATCC25177、土地分枝桿菌ATCC15755、恥垢分枝桿菌ATCC14468，胞內(nèi)分枝桿菌ATCC13950、恥垢分枝桿菌ATCC607有近30個蛋白峰。4個蛋白峰為分枝桿菌共有，與非結(jié)核分枝桿菌分泌蛋白指紋圖譜比較，1個蛋白峰為結(jié)核分枝桿菌所特有。同時分析其它