乳鐵蛋白素對Jurkat細胞增殖、分化和凋亡機制的研究.pdf

1、牛乳鐵蛋白素(lactoferricin B，LfcinB)是一種抗菌活性非常高的微生物活性肽，且來源廣泛。在發(fā)揮抗腫瘤活性的濃度范圍內，LfcinB對人體正常的細胞沒有影響，但是它對人類許多腫瘤細胞系具有細胞毒作用，呈現(xiàn)出一定的針對性。本課題將人工合成的LfcinB作用于人急性T細胞白血病的T淋巴細胞(Jurkat cell)，應用流式細胞術(Flow Cytometry，F(xiàn)CM)、蛋白質免疫印跡分析法（Western Blottin

2、g）研究LfcinB對Jurkat細胞增殖、分化和凋亡的影響，將細胞增殖、分化和凋亡的機制系統(tǒng)地結合起來進行分析和討論。
　　 本課題的主要研究內容包括四部分:(1)CCK-8法檢測LfcinB對Jurkat細胞增值的影響。實驗以濃度為100 nmol/mL的雷帕霉素作為對照組，以作用濃度分別為0μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL和400μg/mL的LfcinB作為實驗組，分別測定Jurkat細胞的增

3、值抑制率。結果顯示:LfcinB對Jurkat細胞增殖的影響效果隨著其作用濃度和時間的增加而增大，即呈現(xiàn)明顯的濃度時間依賴性;(2)利用熒光倒置顯微鏡檢測濃度分別為0μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL和400μg/mL的LfcinB作用Jurkat細胞24 h后的形態(tài)學變化。結果顯示:實驗組細胞的細胞核發(fā)生濃縮，呈濃密染色狀態(tài)，而空白組細胞的細胞核則呈均勻染色狀態(tài)，此結果表明實驗組的細胞發(fā)生凋亡;(3) An

4、nexin V-FITC/PI雙標記流式細胞術分析不同濃度的LfcinB作用Jurkat細胞不同時間后，細胞發(fā)生早期凋亡的變化規(guī)律。實驗以濃度為100 nmol/mL的雷帕霉素作為對照組，以作用濃度分別為0μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL和400μg/mL的LfcinB作為實驗組，分別測定Jurkat細胞的早期凋亡率。
　　 結果顯示:在相同的LfcinB作用時間內，Jurkat細胞的早期凋亡率隨著

5、LfcinB作用濃度的增大而增加;對于同一作用濃度的LfcinB，當作用時間到達72 h時，其早期凋亡率有明顯的下降趨勢，而晚期凋亡或是壞死細胞的比例有所增加;(4) Western blot法檢測并分析不同濃度的LfcinB作用Jurkat細胞不同時間后，Jurkat細胞內P21waf(1)、AKT、mTOR的磷酸化程度變化和Nocth1、C-MYC、Bcl-2、Bax、Cyclin D1的蛋白表達程度的變化，實驗分為8組，分別為雷帕

6、霉素組(100 nmol/mL)、0μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL、雷帕霉素+PI3K抑制劑和LfcinB+PI3K抑制劑;結果顯示:Jurkat細胞內的P21waf(1)、AKT、mTOR的磷酸化程度隨著LfcinB濃度的升高和作用時間的延長而降低;Nocth1、C-MYC、Bcl-2、Cyclin D1的蛋白表達程度與LfcinB的作用時間和濃度呈負相關，而Bax的蛋白表達程度與Lf