酶解乳鐵蛋白制取乳鐵素的工藝方法研究.pdf

1、本文主要研究了利用乳鐵蛋白水解產(chǎn)生乳鐵素并進一步提取純化的方法，對酶解條件進行了優(yōu)化，并建立了數(shù)學(xué)模型，對今后的工業(yè)化生產(chǎn)具有一定的指導(dǎo)意義，研究成果主要包括：
　　 1．試驗室規(guī)模離子交換色譜分離純化乳鐵素的優(yōu)化條件為：HiTrap Q HP柱(1mL)、緩沖液A為20mM甘氨酸—NaOH，pH10.8；緩沖液B為20mM甘氨酸—NaOH，1.0M NaCl，pH10.8；洗脫梯度為20分鐘A液從25％增到75％、柱溫25℃、

2、流速1mL/min。
　　 2．采用胃蛋白酶、堿性蛋白酶、中性蛋白酶、風味蛋白酶和木瓜蛋白酶等五種蛋白酶，分別進行水解乳鐵蛋白提取乳鐵素的試驗，試驗結(jié)果表明，胃蛋白酶的水解效率遠遠高于其他蛋白酶，且產(chǎn)生的可見雜質(zhì)少，過膜效率高。在反應(yīng)溫度為37℃、底物濃度5g乳鐵蛋白/100mL水、酶用量1500u/g、pH2、反應(yīng)時間120min的試驗條件下，乳鐵素得率為1.38％。
　　 3．通過單因素試驗初步得出胃蛋白酶水解體系每

3、個因素較理想點的組合：酶解時間60min、底物濃度3g/100mL、溫度37℃、酶用量1000u/g、pH2.5。
　　 4．通過正交試驗獲得以得率為目標的優(yōu)化工藝條件：底物濃度2g/100mL、酶用量1250u/g、反應(yīng)時間75min，反應(yīng)pH2.3，乳鐵素得率為1.72％。
　　 5．通過正交試驗獲得以純度為目標的優(yōu)化工藝條件：底物濃度4g/100mL、酶用量750u/g、反應(yīng)時間75min，反應(yīng)pH2.5；乳鐵素粗

4、制品純度為43.50％。
　　 6．對酶解條件進行二次旋轉(zhuǎn)正交組合回歸分析，得到回歸方程為：Y=1.63—0.04X1+0.09X3+0.14X4—0.044X21—0.04X1X3—0.08X1X4—0.13X22—0.29X2X3+0.10X23—0.15X3X4—0.05X24。得出的優(yōu)化工藝條件為：底物濃度1.1591g/100mL，酶用量829.55u/g，反應(yīng)時間87.61min，pH2.87，在此條件下乳鐵素的得率