基于氧化還原滴定檢測(cè)血清抗氧化能力及其與HLA-DQB1多態(tài)性的關(guān)聯(lián).pdf

1、目的:本文基于氧化還原滴定，建立了四種測(cè)定人體血清中抗氧化能力的方法，為抗氧化能力的檢測(cè)以及與抗氧化能力有關(guān)的疾病的診斷、治療及預(yù)防提供可靠的依據(jù);同時(shí)還觀察了老年人抗氧化能力、免疫功能以及臨床常用生化指標(biāo)的變化，并在分子水平上研究HLA-DQB1基因多態(tài)性與人體抗氧化能力的關(guān)聯(lián)。
　　 方法:
　　 1.在經(jīng)典的高錳酸鉀滴定法的基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn)，分別創(chuàng)建了在96-微孔板以及在瓊脂介質(zhì)中測(cè)定血清中抗氧化能力的方法，并在稀釋

2、實(shí)驗(yàn)、重復(fù)性實(shí)驗(yàn)以及臨床標(biāo)本的檢測(cè)中驗(yàn)證這兩種方法的準(zhǔn)確性以及潛在的臨床運(yùn)用價(jià)值。
　　 2.在經(jīng)典的碘量法基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn)，分別建立了在96-微孔板以及在瓊脂介質(zhì)中測(cè)定血清中與碘單質(zhì)反應(yīng)的抗氧化劑的抗氧化能力的方法，并在稀釋實(shí)驗(yàn)、重復(fù)性實(shí)驗(yàn)以及臨床標(biāo)本的檢測(cè)中驗(yàn)證這兩種方法的準(zhǔn)確性和潛在的臨床運(yùn)用價(jià)值。
　　 3.隨機(jī)選擇六份血清，并配制六種蛋白溶液，其濃度與血清中蛋白濃度相近，用以上新建立的四種方法分別測(cè)定這六份血清以

3、及六份蛋白溶液的抗氧化能力，驗(yàn)證這四種方法是否可以測(cè)定出血清抗氧化劑中的有機(jī)部分（蛋白）。
　　 4.在醫(yī)院的健康體檢者中選取75歲以上的老年人血清，同時(shí)選取25-35歲之間的年輕體檢者血清，分別用我們建立的四種方法測(cè)定兩組人群中抗氧化能力的大小，并同時(shí)檢測(cè)四種天然抗體（抗卵清蛋白抗體、抗淀粉多糖抗體、抗魚精蛋白抗體和抗傷寒多糖抗體）、臨床常用生化指標(biāo)（谷丙轉(zhuǎn)氨酶、r-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶、總蛋白、白蛋白、白球比

4、、尿素、肌酐、葡萄糖、甘油三酯、總膽固醇、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白）在兩組人群中的差異，并分析抗氧化能力的大小與天然抗體的含量以及常用臨床生化指標(biāo)是否有關(guān)聯(lián)。
　　 5.同時(shí)采集上述兩組人群的全血標(biāo)本，采用PCR-SSP技術(shù)檢測(cè)兩組人群中的HLA-DQB1等位基因，分析HLA-DQB1等位基因與抗氧化能力的關(guān)聯(lián)。
　　 結(jié)果:
　　 1.新建立的高錳酸鉀微量板滴定法測(cè)定血清中抗氧化能力，其血清稀釋實(shí)驗(yàn)具有良好的

5、線性關(guān)系，重復(fù)性實(shí)驗(yàn)中，批內(nèi)穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)的CV值為0.929％，批間穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)的CV值為0.692％，表示該方法具有良好的穩(wěn)定性;用本法測(cè)定的血清總抗氧化能力，老年組明顯低于年輕組，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 2.新建立的在瓊脂介質(zhì)中運(yùn)用高錳酸鉀滴定法測(cè)定血清總抗氧化能力，其血清稀釋實(shí)驗(yàn)具有良好的線性關(guān)系，在重復(fù)性實(shí)驗(yàn)中，批內(nèi)穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)CV值為2.246％，批間穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)CV值為5.350％，表明該方法具有良好的穩(wěn)定

6、性;用本法測(cè)定的血清總抗氧化能力，老年組明顯低于年輕組，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 3.新建立的在微板中測(cè)定血清中與碘單質(zhì)反應(yīng)的物質(zhì)的抗氧化能力，其血清稀釋實(shí)驗(yàn)具有良好的線性關(guān)系，在重復(fù)性實(shí)驗(yàn)中，批內(nèi)穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)CV值為3.329％，批間穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)CV值為7.219％，表明該方法具有良好的穩(wěn)定性;用本法測(cè)定的血清總抗氧化能力，老年組明顯低于年輕組，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 4.新建立的在瓊脂介

7、質(zhì)中測(cè)定血清中與碘單質(zhì)反應(yīng)的物質(zhì)的抗氧化能力，其血清稀釋實(shí)驗(yàn)具有良好的線性關(guān)系，在重復(fù)性實(shí)驗(yàn)中，批內(nèi)穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)的CV值為3.942％，批間穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)CV值為22.390％;用本法測(cè)定的血清總抗氧化能力，老年組明顯低于年輕組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 5.新建立的四種方法主要測(cè)定血清抗氧化系統(tǒng)中的蛋白成分，且蛋白成分在血清抗氧化能力中發(fā)揮主要作用。
　　 6.四種方法測(cè)定的老年組血清抗氧化能力明顯低于青年組血

8、清抗氧化能力，p值小于0.05，;四種天然抗體（抗卵清蛋白抗體、抗淀粉抗體、抗傷寒多糖抗體以及抗牛血清白蛋白抗體）在老年組血清中明顯升高，p值均小于0.05，有顯著差異;常用臨床生化指標(biāo)檢測(cè)中，總蛋白，白蛋白，白球比老年組相較于青年組明顯降低，谷草轉(zhuǎn)氨酶，乳酸脫氫酶，尿素，葡萄糖，甘油三酯，總膽固醇老年相較于青年組明顯升高(P＜0.05)
　　 7.在相關(guān)性分析中，我們發(fā)現(xiàn)抗氧化能力的大小與天然抗體的含量無顯著性差異;抗氧化能力