核苷(酸)類似物抗HBV療效與患者外周血Treg比率及IFN-γIL-10關系的研究.pdf

1、研究背景：乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus，HBV) 慢性感染是一個全球性公共衛(wèi)生問題，嚴重危害人民的身體健康?？笻BV是治療慢性乙型肝炎（Chronic hepatitis B，CHB）的關鍵。核苷（酸）類似物如拉米夫定、阿德福韋酯及恩替卡韋等是臨床應用廣泛的抗病毒藥物，這類藥物主要藥理機制是通過抑制HBV DNA 多聚酶活性，抑制病毒復制。然而，HBV能否被徹底清除，除依賴有效的抗病毒治療外，還依賴機體免疫應答反應。

2、臨床評價抗HBV 療效主要指標不僅包括患者體內HBV DNA 復制水平和ALT水平，而且還包括患者的免疫應答反應狀態(tài)。對于e抗原陽性患者，HBeAg 血清學轉換是抗病毒治療終點關鍵指標，提示HBeAg 血清學轉換與機體抗病毒免疫應答有關。CD4+CD25+調節(jié)性T細胞（CD4+CD25+regulatory T cell，Treg)是目前所發(fā)現(xiàn)的最重要的專職免疫抑制性調節(jié)細胞，在病原體的慢性持續(xù)性感染過程中，起維持免疫耐受的作用。有研究

3、發(fā)現(xiàn)，CD4+CD25+Treg細胞與HBV 感染的慢性化有關。IFN-γ主要由活化的T細胞（包括Th0、Th1細胞和幾乎所有的CD8+T細胞）和NK細胞產生，介導體內的炎癥反應，在控制HBV 感染中起著重要作用；
　　 IL-10是一重要的免疫抑制因子，具有抑制NF-κ B 活性及其介導的炎性介質分泌而阻止肝損傷作用，在HBV 感染的免疫耐受中起著重要作用。但是，目前為止，關于核苷（酸）類藥物治療對機體免疫應答的影響的研究尚少

4、。本研究擬檢測核苷（酸）類似物抗病毒治療對CD4+CD25+Treg細胞和IFN-γ、IL-10的影響及CD4+CD25+Treg與細胞因子的相關性，探討核苷（酸）類藥物抗病毒治療療效與機體免疫功能的關系，為在核苷（酸）類似物抗病毒治療過程中，根據(jù)機體免疫應答狀態(tài)進行療效預測提供依據(jù)。
　　 目的：探討慢性乙型肝炎患者經核苷（酸）類似物抗病毒治療，對HBeAg不同轉歸者外周血CD4+CD25+Treg細胞比率的影響；分析CD4+

5、CD25+Treg 比率變化與IFN-γ和IL-10表達水平的關系。
　　 方法：HBeAg 陽性的CHB患者103例，核苷（酸）類似物抗病毒治療104周后，發(fā)生病毒學應答的94例患者：根據(jù)HBeAg 轉歸情況，將其分為HBeAg 未變化組52例，HBeAg/HBeAb 血清學轉換組28例，HBeAg 轉陰組14例。10例健康志愿者作為正常對照組。所有研究對象采集空腹靜脈血，分離單核淋巴細胞(PBMC)，應用流式細胞術檢測CD4

6、+CD25+FoxP3+調節(jié)性T細胞占CD4+T細胞的比例；采用雙抗夾心ELISA 法檢測其血清IFN-γ、IL-10水平。采用ELISA 法檢測血清乙肝病毒標記物，全自動生化分析儀檢測ALT、AST、A/G、TBIL等肝功能項目，熒光定量PCR 法檢測HBV-DNA。
　　 結果：
　　 1.本組病例檢測結果顯示，患者外周血的CD4+CD25+Treg 比率高于正常對照組（P＜
　　 0.01），經核苷（酸）類

7、似物抗病毒治療后CD4+CD25+Treg 比率較治療之前降低（P＜0.01），但仍高于正常對照組（P＜0.05）。
　　 2.根據(jù)治療后HBeAg 變化情況分組檢測結果顯示，HBeAg 未變化組的CD4+CD25+Treg比率顯著高于HBeAg/HBeAb 轉換組和對照組（P＜0.05），HBeAg 轉陰組CD4+CD25+Treg 比率較HBeAg 未變化組降低，但無顯著統(tǒng)計學差異（P＞0.05），HBeAg/HBeAb 轉

8、換組、HBeAg轉陰組和對照組CD4+CD25+Treg 比率無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。
　　 3.根據(jù)治療后HBeAg 變化情況分組檢測IFN-γ和IL-10水平結果顯示，HBeAg/HBeAb轉換組的IFN-γ表達水平高于HBeAg 未變化組和轉陰組（P＜0.05）；IL-10表達水平低于HBeAg 未變化組（P＜0.05）和HBeAg 轉陰組（但無明顯統(tǒng)計學差異，P＞0.05）；HBeAg/HBeAb 轉換組、HBeA

9、g 未變化組及轉陰組的IFN-γ和IL-10水平均高于對照組（P＜0.05）。
　　 4.患者的CD4+CD25+Treg與IL-10呈正相關（P＜0.05），與IFN-γ呈負相關（P＜0.05）。
　　 結論：
　　 1.患者外周血的CD4+CD25+Treg 比率高于對照組，核苷（酸）類似物抗HBV 可使患者外周血CD4+CD25+Treg 比率降低，其中經過治療，達到HBeAg/HBeAb 轉換或 HBeA

10、g 轉陰者，其比率可降至正常水平。表明核苷（酸）類藥物直接藥理作用機制，雖然是抑制HBV的復制，但它還可能通過降低CD4+CD25+Treg 比率調節(jié)機體的免疫應答。
　　 2.核苷（酸）類似物抗HBV 治療后，HBeAg/HBeAb 轉換組，IFN-γ水平顯著高于HBeAg未變化組和轉陰組，而IL-10水平則低于未變化組和轉陰組；患者的外周血CD4+CD25+Treg比率與IL-10水平呈正相關，與IFN-γ呈負相關。結果提示