基于氧化應(yīng)激研究養(yǎng)陰益氣活血法防治GK大鼠大血管病變的機(jī)理.pdf

1、目的：本研究采用全轉(zhuǎn)錄組表達(dá)譜芯片數(shù)據(jù)篩選的方法尋找養(yǎng)陰益氣活血法防治糖尿病大血管病變的分子靶點(diǎn)，從差異基因表達(dá)和相關(guān)代謝通路角度探討?zhàn)B陰益氣活血法通過抗氧化應(yīng)激防治糖尿病大血管病變的分子機(jī)制，為中藥防治糖尿病大血管病變提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法：將160只空腹血糖≥11.0mmol/L的7~8周齡雄性自發(fā)性2型糖尿病GK大鼠隨機(jī)分成模型組、參芪復(fù)方高劑量組、參芪復(fù)方中劑量組、參芪復(fù)方低劑量組、西藥二甲雙胍組共五組，每組均連續(xù)12周

2、給予高脂飼料喂養(yǎng)，最終造成糖尿病大血管病變模型。另設(shè)32只Wistar大鼠為空白組，給予普通飼料喂養(yǎng)。各組進(jìn)行干預(yù)治療16周，其中模型組給予10ml/kg.d生理鹽水灌服，參芪復(fù)方高、中、低劑量組分別給予28.8g/kg.d、14.4g/kg.d、7.2g/kg.d參芪復(fù)方浸膏灌服，二甲雙胍組給予0.1g/kg.d二甲雙胍灌服。實(shí)驗(yàn)期間觀察GK大鼠的飲水量及進(jìn)食量，分別在藥物干預(yù)0周、8周、16周三個(gè)時(shí)間段，每組隨機(jī)抽取10只GK大鼠，

3、檢測(cè)血糖、3-硝基酪氨酸（3-NT）、血清氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）；提取主動(dòng)脈血管組織檢測(cè)超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活性與水平；每組隨機(jī)抽取6只GK大鼠作HE和Masson染色觀察主動(dòng)脈病理形態(tài)學(xué)，比較不同干預(yù)方式抑制模型大鼠的氧化應(yīng)激反應(yīng)的效果。于實(shí)驗(yàn)第16周借助表達(dá)譜芯片技術(shù)獲得的差異基因，運(yùn)用GO富集和pathway分析，結(jié)合基因表達(dá)譜分析參芪復(fù)方產(chǎn)生影響的分子機(jī)制。
　　結(jié)果：①

4、參芪復(fù)方各組飲水量、進(jìn)食量較模型組減少。②參芪復(fù)方各組在各時(shí)間段均能有效降低血糖、氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)水平，有效下調(diào)膠原纖維和血管壁面積比。③參芪復(fù)方中劑量組可明顯調(diào)節(jié)主動(dòng)脈血管組織SOD、GSH-Px、3-NT、ox-LDL水平，降低高糖引起的氧化應(yīng)激反應(yīng)，第8周效佳。④光鏡觀察顯示：參芪復(fù)方對(duì)高糖引起的血管內(nèi)皮損傷具有較好的保護(hù)作用，減少膠原纖維的產(chǎn)生，以參芪復(fù)方高、中劑量組效果最明顯。⑤經(jīng)GO注釋、Pathway分析，參芪復(fù)方中劑量組

5、與模型組差異表達(dá)基因和涉及信號(hào)通路有Sod1、Sod2、Pon1、Pon3、Elavl1、Lama4，JAK/STAT和Notch信號(hào)通路，主要涉及血管新生、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞黏附、細(xì)胞代謝等功能。
　　結(jié)論：養(yǎng)陰益氣活血法能干預(yù)大血管病變GK大鼠糖脂代謝紊亂，氧化應(yīng)激，血管內(nèi)皮損傷，動(dòng)脈硬化，以中劑量組第8周綜合效果最佳。其作用機(jī)理可能是通過調(diào)控Sod1、Sod2，Pon1、Pon3、Elavl1、Lama4基因和JAK/STAT、