咳喘安膠囊抗炎平喘作用及其機制的研究.pdf

1、目的：
　　氣道炎癥與支氣管哮喘、慢性阻塞性肺疾?。–OPD）的發(fā)病密切相關，其他肺疾病如纖維囊性變（CF）及支氣管肺發(fā)育不良（BPD）亦常存在持續(xù)氣道炎癥。慢性氣道炎癥多伴有氣道壁及實質的結構改變，致使影響呼吸功能。氣道結構并非固定不變，炎癥細胞及基質蛋白常呈動態(tài)轉換，致使發(fā)病機理及臨床表現更趨復雜。目前認為最有效的抗炎藥糖皮質激素類藥物并不能從根本上逆轉哮喘的自然病程，不能糾正潛在的免疫失調，長期使用還會減弱機體的保護性免疫力

2、，導致全身性的副作用。中醫(yī)藥治療哮喘具有療效好，作用靶點多、副作用小、療效確切、善于預防、長于治本等優(yōu)點，在哮喘的防治中有不可替代的作用，因此，廣泛、深入研究中醫(yī)藥治療哮喘的作用及機理，不僅有助于闡明中醫(yī)哮病理論的現代科學內涵，還有其重要的臨床意義。
　　方法：
　　實驗一咳喘安膠囊的鎮(zhèn)咳祛痰藥理作用研究
　　50只昆明種小鼠隨機分成5組?？瞻讓φ战M灌胃給予同體積生理鹽水；陽性對照組灌胃給予苯丙哌林(54mg·kg-1

3、)；3個實驗組分別灌胃給予咳喘安膠囊低、中、高劑量，每日1次，連續(xù)10d。分別于第11d、12d及13d，各組給藥1h后，將小鼠按組交替逐只放入YLS-8A多功能誘咳引喘儀中，濃氨水霧化吸入刺激5s、10s及2min，記錄小鼠咳嗽潛伏期和2min內咳嗽次數。
　　實驗二咳喘安膠囊對哮喘小鼠的抑制作用及其機理研究
　　60只BALB/c小鼠按照隨機數字表法分為6組：正常對照組、哮喘模型組組、陽性對照組、咳喘安低劑量組、咳喘安中

4、劑量組、咳喘安高劑量組。于實驗第0、7和14d分別致敏，共三次。從實驗第15天，除正常組外各組小鼠以3％（m/v）OVA進行霧化吸入激發(fā)，每天霧化30min，連續(xù)霧化14天，正常對照組以生理鹽水代替OVA霧化激發(fā)。各治療組在霧化激發(fā)后當天開始每天給予相應藥物,直至霧化結束，全程給藥14天。陽性對照組給予腹腔注射地塞米松注射液2.0mg/kg體質量劑量，咳喘安低、中、高劑量組小鼠灌胃給予咳喘安膠囊混懸液,劑量分別406mg/kg，812m

5、g/kg，1624mg/kg；正常對照組和模型對照組均灌胃給予生理鹽水0.5ml。各組均經末次激發(fā)24h后處死。迅速摘取肺臟，右葉肺制成組織勻漿進行生化檢測，左葉肺投入10％甲醛中固定，常規(guī)包埋，切片，進行HE、免疫組化染色，光學顯微鏡下觀察病變的程度。肺組織勻漿后進行丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）含量檢測。血清用于免疫球蛋白E（IgE）、白介素17（IL-17）的測定。
　　實驗三咳喘安膠囊對慢性支氣管炎小鼠的治療作用及其機

6、制研究
　　60只昆明小鼠按照隨機數字表分為6組：正常對照組、慢支模型組組、陽性對照組、咳喘安低劑量組、咳喘安中劑量組、咳喘安高劑量組。參照文獻造模方法并加以改進,建立煙熏聯合氨水刺激致小鼠慢性支氣管炎模型?？却驳?、中、高劑量組小鼠灌胃給予咳喘安膠囊混懸液,劑量分別406mg/kg，812mg/kg，1624mg/kg；陽性藥組小鼠灌氨茶堿片水溶液,劑量為69.9mg/kg；正常對照組和模型對照組均灌胃給予生理鹽水0.5ml；各

7、組小鼠灌胃均1次/d,連續(xù)15d。正常組及模型組在煙霧聯合氨水刺激后，其余治療各組小鼠均于給藥第15d的次日上午摘眼球取血處死。迅速摘取肺臟，右葉肺制成組織勻漿進行生化檢測，左葉肺投入10％甲醛中固定，常規(guī)包埋，切片，進行HE、免疫組化染色，光學顯微鏡下觀察病變的程度。肺組織勻漿后進行丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）、髓過氧化物酶（MPO）含量檢測。
　　結果：
　　實驗一咳喘安膠囊各劑量組與空白對照組比較均能非常顯著地增

8、加小鼠氣管酚紅排泌量（p<0.01），但3個劑量組之間并未呈現明顯量效關系。其中劑量組的作用略強于NH4Cl組。對于不同的激發(fā)時間，咳喘安膠囊各劑量均能顯著延長小鼠咳嗽潛伏期（ICP）(p<0.05)，激發(fā)時間為2分鐘時，咳喘安膠囊中、高兩個劑量組與空白對照組相比，有非常顯著性差異(p<0.01)。同時，咳嗽次數明顯減少，各劑量組與空白對照組相比有顯著性差異(p<0.05)，各劑量組止咳效果同于苯丙哌林組。
　　實驗二模型對照組與

9、正常組相比，MDA含量顯著高于正常對照組，顯示哮喘時，肺內氧化還原反應失衡。而地塞米松組與模型組相比，兩者沒有顯著性差異。咳喘安膠囊各劑量組與模型對照組相比，均能顯著降低小鼠肺組織中MDA的含量（p<0.01），且顯著低于正常對照組，3個劑量組之間并未呈現明顯量效關系。咳喘安膠囊中劑量組的作用略強于高劑量和低劑量組。而且模型組與正常組相比，NO含量顯著高于正常組，在給予地塞米松和咳喘安治療后，小鼠肺組織中NO含量顯著降低，各治療組與模型

10、組相比均有顯著性差異。與正常組相比，哮喘模型組小鼠血清中IgE含量顯著高于正常對照組；各治療組與模型組相比，均顯著降低?？却材z囊各劑量組與模型對照組相比，均能顯著降低小鼠肺血清中IgE的含量（p<0.01），且3個劑量組之間呈現一定的量效關系，其中，中高劑量組IgE水平降至正常。模型對照組與正常組相比，BALF中EOS含量顯著高于正常對照組?？却哺髦委熃M與模型組相比，均顯著低于模型組（p<0.01），且各劑量組與正常對照組沒有顯著性

11、差異，3個劑量組之間也不呈現量效關系。
　　實驗三模型對照組與正常組相比，MDA含量顯著高于正常對照組，氨茶堿組與模型組相比，MDA含量降低，兩者有顯著性差異。咳喘安膠囊各劑量組與模型對照組相比，均能顯著降低小鼠肺組織中MDA的含量（p<0.05），3個劑量組之間并未呈現明顯量效關系?？却材z囊中劑量組的作用略強于高劑量和低劑量組。模型組與正常組相比，NO含量顯著高于正常組，氨茶堿組顯著低于模型組，與正常組相比沒有顯著性差異。給予

12、咳喘安膠囊治療后，小鼠肺組織中NO含量顯著降低，各治療組與模型組相比均有顯著性差異，各劑量之間相比，沒有顯著性差異。MPO的比較中，模型組與正常組相比，MPO含量顯著高于正常組，氨茶堿組顯著低于模型組。給予咳喘安膠囊治療后，各劑量組與模型組相比，均顯著低于模型組，低劑量組與氨茶堿組相比沒有顯著性差異，咳喘安中高劑量組MPO含量與正常組相比沒有顯著性差異。
　　結論：
　　咳喘安膠囊能顯著減少氨水所致的小鼠咳嗽發(fā)作的次數，有一

13、定的鎮(zhèn)咳作用。同時也能增加小鼠氣管酚紅排出量，表明其能增加呼吸道黏液分泌的功能，使痰液濃度下降，使之易于咳出，有一定的祛痰作用?？却材z囊能夠降低哮喘模型及慢性支氣管炎肺組織中的MDA含量和NO的濃度，并能降低慢性支氣管炎肺組織中MPO活力提示咳喘安膠囊有一定的抗氧化能力，能夠較好的控制哮喘和慢性支氣管炎時機體的炎癥反應。同時咳喘安膠囊能夠降低哮喘小鼠血清中IgE及BALF中IL-17的含量，證明了IgE和IL-17在哮喘發(fā)展過程中的作