旋覆花中倍半萜內酯類成分的抗炎作用及其機制研究.pdf

1、哮喘作為一類異質性疾病，在通常情況下其特征表現為慢性氣道炎癥。哮喘的發(fā)作過程是一種可能由多種炎癥細胞如肥大細胞、巨噬細胞、粒細胞（嗜酸、嗜堿、中性）等和細胞組分共同參與的復雜過程。旋覆花作為一種傳統的中草藥，應用歷史悠久。現代藥理學研究證明，旋覆花具有抗癌、保肝、抗糖尿病等多樣的藥理作用。在前期工作中，本課題組從旋覆花中分離并鑒定了38個單體化合物，并進行了抗炎活性篩選。通過初篩，本文選取具有抑制一氧化氮（ NO）活性較強的倍半萜內酯類

2、化合物6α-isovaleryloxy-1-hydroxy-4αH-1,10-secoeudesma-5(10),1(13)-dien-12,8β-olide（ IVSE）和具有抑制白三烯C4（LTC4）、抑制骨髓源性肥大細胞（BMMC）脫顆粒和抑制信號傳導及轉錄激活因子6（STAT6）活性的多重抗炎作用的倍半萜內酯類化合物1,6-二乙酰基大花旋覆花內酯（1,6-O,O-diacetylbritannilactone，ABLOO）進行其

3、抗炎作用及機制研究。
　　本文第一部分研究IVSE對脂多糖誘導RAW264.7巨噬細胞NO生成的抑制作用及機制；第二部分：①在BMMC細胞中，考察ABLOO對免疫球蛋白E（IgE）/二硝基苯基化人血清白蛋白（DNP-HSA）誘導BMMC細胞生成LTC4和脫顆粒的抑制作用及其機制；②在肺癌上皮細胞 A549中，考察 ABLOO對白細胞介素4（IL-4）誘導嗜酸性粒細胞趨化因子-1（eotaxin-1）和花生四烯酸脂氧合酶15（ALO

4、X15）表達的影響及其機制。
　　第一部分結果表明：IVSE顯著抑制NO的產生，其半數抑制濃度（IC50）為2.20μM，并顯著抑制iNOS的蛋白表達。IVSE顯著下調IκB激酶α/β（IKKα/β）的磷酸化水平、抑制核因子κB抑制蛋白（IκB）的磷酸化及降解，繼而抑制了核轉錄因子-κB（NF-κB）p65的核轉移。IVSE進一步抑制絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路的胞外信號調節(jié)激酶1/2（ERK1/2）、c-Jun氨基末端激酶

5、（JNK）和p38 MAPK的磷酸化。上述結果表明，IVSE抑制LPS誘導NO生成和誘導型一氧化氮合酶（iNOS）表達的作用是通過抑制NF-κB的活性和下調MAPKs磷酸化水平而實現的。另外，IVSE對基質金屬蛋白酶-9（MMP-9）的活性也具有確切的抑制作用。第二部分結果表明：①ABLOO顯著抑制激活的BMMC細胞LTC4的產生（IC50為5.5μM）及其脫顆粒（IC50為10.5μM），其抗炎作用是通過下調胞漿型磷脂酶A2（cPLA

6、2）和磷酯酶Cγ（PLCγ）的磷酸化水平而實現的。②ABLOO有效抑制IL-4誘導的eotaxin-1和ALOX15 mRNA表達，且呈劑量依賴性。作用機制研究表明，ABLOO下調STAT6的磷酸化水平和抑制其轉錄活性，并且下調STAT6上游JAK3的磷酸化水平。因此，ABLOO對IL-4誘導A549細胞eotaxin-1和ALOX15 mRNA表達的抑制作用是通過抑制Janus激酶3（JAK3）和STAT6的磷酸化及降低STAT6的轉