Ⅰ型酷氨酸血癥模型小鼠酒精性肝損傷敏感性研究.pdf

1、酒精性肝損傷嚴重影響著人體健康,其發(fā)病機制需進一步研究,Ⅰ型酪氨酸血癥模型小鼠對酒精敏感性的研究至今未見報道。
　　 目的：
　　 利用延胡索酰乙酰乙酸水解酶(Fuarylacetoacetate Hydrolase,Fah)基因敲除小鼠建立酒精性肝損傷模型,探討其發(fā)生機制,為防治酒精性肝損傷提供依據(jù)。
　　 材料與方法：
　　 對129小鼠交配繁殖的子代進行基因鑒定,得到雄性Fah基因敲除(Fah-/-

2、)和野生型(Fah+/+)小鼠各20只。兩種小鼠各隨機分為對照組和酒精性肝損傷模型組,每組10只,共4組。根據(jù)Liber-Decarli模型建立小鼠酒精性肝損傷模型,對照組給予無酒精液體飼料。3周后取血,檢測血清丙氨酸轉(zhuǎn)移酶(Alanineaminotransferase,ALT),天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Aspartate aminotransferase,AST),甘油三酯(Triglyceride,TG)。處死小鼠,稱取肝重,計算肝臟

3、指數(shù),制備10％肝勻漿,檢測丙二醛(Malonaldehyde,MDA),超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase,SOD),谷胱甘肽(Glutathione,GSH)。肝臟固定后,做石蠟切片,HE染色觀察肝損傷程度,TUNEL染色檢測肝細胞凋亡情況。提取組織mRNA和蛋白,運用Real-time PCR技術檢測TNF-α,IL-6,TGF-β,Caspase-8,Bax,Bcl-2 mRNA表達水平;應用Western-

4、blot技術檢測凋亡因子Caspase-8,Bax,Bcl-2的蛋白表達水平。
　　 使用SPSS11.5軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析,計量資料用(x-±S)表示,統(tǒng)計分析采用重復測量方差分析和單因素方差分析,以α=0.05作為檢驗水準。
　　 結果：
　　 1小鼠體重和肝臟指數(shù)變化:兩對照組小鼠體重上升,兩模型組小鼠體重下降(P＜0.05)。與各對照組相比,兩模型組肝臟指數(shù)增大(P＜0.05);Fah-/-模型組肝

5、臟指數(shù)顯著性高于Fah+/+模型組(P＜0.05)。
　　 2小鼠血清生化指標和肝臟脂肪的變化:兩對照組血清ALT、AST、TG和肝臟TG水平差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);兩模型組ALT、AST、TG和肝臟TG水平均高于其對照組(P＜0.05):Fah-/-模型組ALT、AST、TG和肝臟TG水平均高于Fah+/+模型組(P＜0.05)。
　　 3小鼠肝臟氧化和抗氧化水平變化:兩對照組肝臟MDA、GSH和SOD差異無

6、統(tǒng)計學意義(P＞0.05);兩模型組肝臟MDA水平均高于其對照組(P＜0.05),GSH、SOD水平均低于其對照組(P＜0.05):Fah-/-模型組肝臟MDA水平高于Fah+/+模型組(P＜0.05),SOD水平低于Fah+/+模型組(P＜0.05);兩模型組肝臟GSH水平差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 4肝臟病理學變化:與對照組相比,兩模型組肝臟體積增大,色澤灰暗,肝臟正常組織結構消失,肝細胞索排列紊亂,胞漿疏松,

7、胞質(zhì)內(nèi)可見脂肪空泡和氣球樣變性。與Fah+/+模型組相比,Fah-/-模型組肝損傷較嚴重。
　　 5相關基因mRNA和蛋白表達情況:兩對照組的TNF-α,IL-6,TGF-β,Caspase-8,Bax,Bcl-2 mRNA表達差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05),兩模型組的TNF-α、IL-6mRNA水平均高于其對照組(P＜0.05),Bcl-2 mRNA水平低于其對照組(P＜0.05);Fah-/-模型組的YNF-α、IL-6和

8、Caspase-8 mRNA水平高于Fah+/+模型組(P＜0.05),Bcl-2 mRNA水平低于Fah+/+模型組(P＜0.05),兩模型組TGF-β和Bax mRNA水平差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。Western-blot結果顯示,兩模型組的Caspase-8、Bax蛋白水平明顯上調(diào),Bcl-2蛋白水平明顯下調(diào):Fah-/-模型組的Caspase-8、Bax蛋白水平高于Fah+/+模型組,Bcl-2蛋白水平低于Fah+/+模