電針對急性酒精性肝損傷小鼠肝血流灌注及氧化應激反應的影響研究.pdf

1、目的：在本科室的針灸對內臟血流調節(jié)效應研究的基礎上，應用已建立的激光散斑小鼠內臟血流成像技術，觀察急性酒精性肝損傷小鼠肝表面血流灌注量及分布的差異，及電針對急性酒精性肝損傷小鼠肝表面血流灌注分布的調節(jié)影響;探索電針對急性酒精性肝損傷小鼠肝組織氧化應激反應的調節(jié)作用，為針灸治療急性酒精性肝損傷疾病提供理論依據。
　　方法：
　　實驗一:急性酒精性肝損傷小鼠模型的制備及肝組織形態(tài)學觀察。將16只健康昆明種小鼠隨機分為健康對照組和

2、急性酒精性肝損傷模型對照組（模型對照組），每組各8只。首先用50％的乙醇15ml/(kg.bw)給模型對照組8只小鼠灌胃1次，灌胃完后禁食不禁水12小時。然后用頸椎脫臼法將兩組小鼠處死并分別迅速取出兩組肝組織做肝組織切片和丙二醛(MDA)、超氧化過物歧化酶(SOD)兩項指標檢測，根據檢測結果確認急性酒精性肝損傷模型制備是否成功。然后觀察急性酒精性肝損傷模型小鼠肝組織HE染色切片（本科室前期工作已做）肝組織形態(tài)的變化。實驗二:電針刺激下的

3、急性酒精性肝損傷模型小鼠肝臟表面血流灌注的激光散斑成像的顯示，健康昆明小鼠和模型小鼠（按實驗一方法制備）各20只分別分為健康對照組、健康電針組、模型對照組和模型電針組。首先在已建立的小鼠肝臟表面血流灌注的激光散斑顯像方法的基礎上，用激光散斑血流成像儀分別對健康對照組小鼠和模型對照組小鼠各10只做連續(xù)30min的肝臟表面血流灌注分布檢測以觀察各時點肝臟血流灌注量的變化情況。其次是對健康電針組和模型電針組小鼠各10只做連續(xù)30min檢測，同

4、時分別給這兩組小鼠電針“足三里”和“太沖”穴30min，以觀察電針刺激過程中小鼠肝臟表面血流灌注量及分布的變化。然后再用激光散斑成像儀的圖像分析軟件進行數據的提取及分析，分別比較健康電針組、模型電針組在電針過程中各時點與電針0min時肝臟表面血流灌注的差異，及健康電針組和健康對照組、模型電針組和模型對照組在同一點的肝臟表面血流灌注的差異，以用來分析電針刺激過程中急性酒精性肝損傷模型小鼠及健康小鼠肝表面血流變化的時-效關系。實驗三:電針刺

5、激對急性酒精性肝損傷模型小鼠肝組織形態(tài)及氧化應激的影響，健康小鼠和模型小鼠各8只（按實驗一方法制備），分成健康電針組和模型電針組各8只。兩組小鼠電針”太沖”、“足三里”30min后用頸椎脫臼法處死，并迅速取出小鼠肝組織做肝組織切片和MDA、SOD兩項指標檢測。觀察電針對急性酒精性肝損傷模型小鼠肝組織形態(tài)的影響，及聯合實驗一的SOD、MDA結果，分別對健康對照組、健康電針組、模型對照組和模型電針組肝組織的兩項生化指標進行比較，探索電針對急

6、性酒精性肝損傷模型小鼠肝組織的氧化應激反應的影響。
　　結果：
　　實驗一結果
　　1.模型小鼠肝組織HE染色切片（前期工作已做）在光鏡下顯示有明顯的病理改變。
　　2.模型小鼠SOD含量比健康小鼠明顯降低(P＜0.05)，MDA含量比健康小鼠升高(P＜0.05)。
　　實驗二結果
　　1.模型小鼠肝表面血流灌注激光散斑成像顯示:在30min的自然檢測中，模型對照小鼠肝表面血流灌注量明顯比健康小鼠肝表

7、面血流灌注量低，肝表面血流灌注量周邊區(qū)也低于中心區(qū)，肝表面血流灌注在連續(xù)檢測過程中有小幅度的波動;健康對照組小鼠肝表面血流灌注量豐富，肝表面周邊區(qū)血流灌注量比肝表面中心區(qū)低，肝表面血流灌注在連續(xù)檢測過程中有小幅度的波動。
　　2.電針刺激過程中模型小鼠肝表面血流灌注激光散斑成像顯示:在電針30min過程中，模型小鼠和健康小鼠肝表面血流灌注量都在逐漸增加。
　　3.肝表面血流灌注定量化分析:模型對照組小鼠肝表面血流灌注量明顯比

8、健康對照組小鼠低(P＜0.05);模型電針組小鼠在電針25min時肝血流灌注量最高，比0min時增加(9.23±12.79)％，模型電針組在電針25min與0min比較有統計學差異，其它各觀察時點與0min比較尚無統計學差異(P＞0.05)。模型電針組與模型對照組同一各觀察時點比較均具有統計學意義(P＜0.05);健康電針組小鼠在電針25min時肝血流灌注量最高，比0min時增加(12.44±10.92％)，健康電針組除電針5min、1

9、0min時外其它各觀察時點與0min比較均有統計學意義(P＜0.05)。健康電針組除電針10min與健康對照組尚無統計學意義(P＞0.05)，其它同一各時點與健康對照組比較均具有統計學意義(P＜0.05);
　　實驗三結果
　　1.電針后，模型小鼠肝組織HE切片在光鏡下顯示肝組織病理性改變有所減輕。
　　2.肝臟組織MDA的定量化分析:模型電針組小鼠肝臟組織MDA含量顯著低于模型對照組(P＜0.001);健康電針組小鼠

10、肝臟組織MDA含量也顯著低于健康對照組(P＜0.05)。
　　3.肝臟組織SOD的定量化分析:模型電針組小鼠肝臟組織SOD含量比模型對照組略高，但仍無統計學意義(P＞0.05);健康電針組小鼠肝臟組織SOD含量與健康對照組比較尚無變化(P＞0.05)。
　　結論：
　　1.用50％的乙醇15ml/(kg.bw)灌胃小鼠1次，灌胃完后禁食不禁水12小時，能使小鼠肝組織發(fā)生氧化應激反應及病理性改變。
　　2.激光散斑