無(wú)患子組織培養(yǎng)再生體系研究.pdf

1、無(wú)患子（Sapindus mukurossi），又名肥皂樹(shù)，是落葉喬木，主要靠種子播種繁殖，但其種皮堅(jiān)硬，蛀蟲(chóng)率高，而且出苗不整齊，周期長(zhǎng)，嚴(yán)重限制了無(wú)患子的自然更新和產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用。組織培養(yǎng)能夠彌補(bǔ)種子繁殖的不足，減少對(duì)外界自然環(huán)境的依賴(lài)程度，不僅能保持母株優(yōu)良特性不變，而且繁殖速度快，繁殖系數(shù)高，可降低生產(chǎn)成本，滿(mǎn)足大規(guī)模種植無(wú)患子的需求，為開(kāi)發(fā)無(wú)患子的科研價(jià)值奠定了深厚的基礎(chǔ)。
　　本文在系統(tǒng)地了解了無(wú)患子國(guó)內(nèi)外植株研究現(xiàn)狀及總

2、結(jié)前人研究工作的基礎(chǔ)上，以無(wú)患子的優(yōu)良品種作為外植體材料，對(duì)無(wú)患子離體快繁體系中各階段的主要影響因素和最佳培養(yǎng)基配方進(jìn)行探討研究，從而建立高效穩(wěn)定的無(wú)患子組織培養(yǎng)技術(shù)體系，為無(wú)患子的規(guī)?；缣峁┮粭l有效途徑，為無(wú)患子苗木的工廠(chǎng)化生產(chǎn)及應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。
　　本研究的主要成果如下：
　　（1）通過(guò)外植體滅菌試驗(yàn)的結(jié)果可知，最好的消毒方法是先用75％酒精消毒10s，然后用0.1%HgCl2消毒8min，最后用2%NaClO消毒5m

3、in，此時(shí)的污染率最低，褐化率也最低，成活率最高。
　?。?）愈傷組織誘導(dǎo)以MS+2,4-D2.0mg·L-1+IBA0.1mg·L-1為最佳培養(yǎng)基組合，誘導(dǎo)效果最好。當(dāng)IBA濃度不變，2,4-D濃度升高，愈傷組織的誘導(dǎo)率也隨著升高，平均啟動(dòng)時(shí)間也越快，誘導(dǎo)出的愈傷組織質(zhì)量也越來(lái)越高；當(dāng)2,4-D濃度不變時(shí)，高濃度的IBA對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)有明顯的抑制作用，平均啟動(dòng)時(shí)間也越來(lái)越慢，愈傷組織會(huì)變成白色的疏松狀，質(zhì)量明顯下降。
　

4、?。?）通過(guò)兩種不同的外植體對(duì)比試驗(yàn)，可知新生頂芽的出芽率明顯優(yōu)于帶腋芽的莖段。新生頂芽接入培養(yǎng)基后，生長(zhǎng)較快，芽體粗壯嫩綠；帶腋芽的莖段在接入培養(yǎng)基的初期，腋芽萌發(fā)速度較慢，芽體細(xì)長(zhǎng)瘦弱，莖段切口處有大量的愈傷組織生成。
　?。?）外植體直接誘導(dǎo)不定芽的最佳培養(yǎng)基為MS+NAA0.2mg·L-1+IBA0.05mg·L-1+6-BA3.0mg·L-1，萌芽率最高，達(dá)94.01%；通過(guò)極差和方差分析可知，各因素對(duì)無(wú)患子芽誘導(dǎo)影響的

5、主次關(guān)系為：NAA>6-BA>IBA；NAA和6-BA對(duì)芽體啟動(dòng)培養(yǎng)的影響都達(dá)到了顯著水平。
　?。?）愈傷組織誘導(dǎo)芽的最佳培養(yǎng)基組合為MS+NAA0.05mg·L-1+6-BA2.5mg·L-1+KT0.5mg·L-1，愈傷組織分化出深綠色的芽體最多，且長(zhǎng)勢(shì)最好；根據(jù)極差R值所得，上述3個(gè)因子對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)芽影響的主次關(guān)系為：NAA>6-BA>KT。且NAA對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)芽有極顯著性影響（P值=0.0074）。
　?。?）

6、在繼代增殖培養(yǎng)中，9種不同激素配比的培養(yǎng)基增殖系數(shù)差異性極顯著（p<0.01），其中處理5的增殖系數(shù)極顯著的高于其他處理，達(dá)4.20，且沒(méi)有愈傷組織形成，芽體最健壯，苗的長(zhǎng)勢(shì)也最好，因此處理5：IBA0.02mg·L-1+6-BA1.0mg·L-1為增殖培養(yǎng)中最優(yōu)的激素配比組合。
　　相同濃度的IBA，在不同濃度的6-BA作用下，其增殖系數(shù)出現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，因此高濃度的6-BA對(duì)不定芽增殖培養(yǎng)有抑制作用。當(dāng)6-BA濃度一定時(shí)

7、，和高濃度的IBA組合，基部會(huì)出現(xiàn)少量的愈傷組織，由此可以判斷，高濃度的IBA會(huì)促使不定芽在增殖培養(yǎng)中形成愈傷組織，抑制不定芽的發(fā)生。
　?。?）通過(guò)壯苗培養(yǎng)試驗(yàn)可知，MS+NAA0.1mg·L-1+GA30.1mg·L-1處理下的組培苗長(zhǎng)勢(shì)最差，MS+NAA0.5mg·L-1+GA30.3mg·L-1處理下的組培苗生長(zhǎng)最好，葉多濃綠，說(shuō)明高濃度的NAA和GA3對(duì)組培苗的生長(zhǎng)較好，苗較粗壯。
　?。?）在探討不同的植物生長(zhǎng)調(diào)

8、節(jié)劑對(duì)生根培養(yǎng)的影響試驗(yàn)中，1/2MS+IBA0.5mg·L-1+NAA0.1mg·L-1的生根率最高，為80.47%，是生根培養(yǎng)最適宜的培養(yǎng)基。IBA和NAA配合使用比單獨(dú)使用IBA效果要好；但高濃度的IBA會(huì)抑制根的發(fā)生。
　?。?)不同的生根促進(jìn)劑對(duì)生根培養(yǎng)也有顯著的影響，ABT1和GGR6對(duì)無(wú)患子的生根誘導(dǎo)上起到了極顯著性影響，各濃度均可在不同程度誘導(dǎo)生根。其中處理I2：1/2MS+ABT12.0mg·L-1生根率最高，達(dá)

9、77.67％，根最多，且生長(zhǎng)最好。在1.0-4.0mg·L-1范圍內(nèi)，隨著ABT1濃度的增加，無(wú)患子組培苗生根率呈現(xiàn)出先增加后降低的趨勢(shì)；隨著GGR6濃度的增加，生根率呈現(xiàn)出下降的趨勢(shì)。由此可知，當(dāng)生根促進(jìn)劑濃度過(guò)高時(shí)，會(huì)抑制生根的效果。
　?。?0）從煉苗方案的試驗(yàn)結(jié)果可以看出，最佳的煉苗方式為閉瓶鍛煉4d，開(kāi)瓶鍛煉3d，其平均成活率可達(dá)84.46%。而只經(jīng)過(guò)開(kāi)瓶鍛煉或只經(jīng)過(guò)閉瓶鍛煉的試驗(yàn)組，其成活率均較低。由此可以得到以下幾個(gè)

10、結(jié)論：①煉苗過(guò)程對(duì)組培苗的移栽成活率有重要影響，經(jīng)過(guò)煉苗處理的平均成活率顯著高于不煉苗的組培苗；②煉苗時(shí)間的長(zhǎng)短對(duì)試管苗移栽成活率有著極顯著的影響；③閉瓶鍛煉和開(kāi)瓶鍛煉兩個(gè)過(guò)程均必不可少，缺少其中一個(gè)階段都將降低移栽成活率。
　?。?1）在移栽時(shí)，不同的基質(zhì)類(lèi)型對(duì)無(wú)患子小苗的成活率有顯著性影響，小苗的生長(zhǎng)狀況也有很大的差異。試驗(yàn)結(jié)果表明，泥炭土：珍珠巖：河沙=1：1：1的成活率極顯著的高于其他基質(zhì)類(lèi)型，達(dá)到83.27%，小苗健壯，