綿羊K1f4和Lin28基因的克隆與序列分析.pdf

1、自小鼠iPS獲得成功以來,iPS技術(shù)獲得不斷完善。已研究證實(shí),Oct4、Sox2、Klf4、lin28和Nanog等是重要的iPS誘導(dǎo)因子。迄今為止尚未見有關(guān)綿羊的iPS誘導(dǎo)因子獲得綿羊iPS的相關(guān)報(bào)道。本研究采用分子生物的方法,在克隆獲得綿羊Klf4和Lin28因子的基礎(chǔ)上,對其序列進(jìn)行了分析并預(yù)測了相關(guān)蛋白的特征,該項(xiàng)研究為進(jìn)一步完善綿羊的iPS方法奠定了基礎(chǔ)。通過本實(shí)驗(yàn)獲得了如下的結(jié)果。
　　 (1)參照GenBank上牛

2、、豬和小鼠等序列,利用胎綿羊的腸和腎組織,采用RT-PCR方法,分別克隆獲得1434bp的綿羊Klf4基因的編碼區(qū)序列和631bp的綿羊Lin28基因的編碼區(qū)序列。
　　 (2)采用DNAStar、DNAMAN軟件和GenBank數(shù)據(jù)庫資料對所克隆的綿羊Klf4基因編碼區(qū)序列進(jìn)行分析,結(jié)果與牛、豬和小鼠等的Klf4基因編碼區(qū)序列具有較高的同源性,其中與牛的同源性達(dá)到98.2％；采用相同方法分析綿羊KLF4蛋白的預(yù)測結(jié)果,與牛、豬

3、和小鼠等的KLF4蛋白同樣具有較高的同源性,其中與牛的同源性可達(dá)199.7％。
　　 (3)利用在線工具M(jìn)otif Scan對綿羊KLF4蛋白的分析顯示,綿羊KLF4含有細(xì)胞核定位模體以及鋅指結(jié)構(gòu)域。
　　 (4)采用DNAStar、DNAMAN軟件和GenBank數(shù)據(jù)庫資料對所克隆的綿羊Lin28基因編碼區(qū)序列進(jìn)行分析,結(jié)果與牛、豬和小鼠等的Lin28基因編碼區(qū)序列具有較高的同源性,其中與小鼠的同源性可達(dá)98.9％；采