CTR1核心巖藻糖基化修飾在卵巢癌細(xì)胞順鉑吸收過程中發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用.pdf

1、上皮性卵巢癌是目前為止全世界最致命的婦科惡性腫瘤。對于患者來說，卵巢癌的常規(guī)治療是腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)，術(shù)后聯(lián)合鉑類與紫杉醇的一線化療方案。卵巢癌患者對于鉑和紫杉醇一線化療的臨床反應(yīng)率大約有80％。雖然具有高的響應(yīng)率，但是上皮性卵巢癌的耐藥性較高，預(yù)后性差，晚期卵巢癌患者5年的生存率小于30％。
　　耐藥性的產(chǎn)生與細(xì)胞內(nèi)鉑類藥物攝入的減少、解毒的能力增強(qiáng)、凋亡途徑異常以及DNA損傷后DNA修復(fù)能力的增強(qiáng)等相關(guān)。其中，順鉑攝取的抑制被認(rèn)為

2、是卵巢癌順鉑耐藥的主要原因，它通常發(fā)生在卵巢惡性腫瘤的惡性轉(zhuǎn)化過程中。細(xì)胞膜上的銅轉(zhuǎn)運體1(CTR1)是一種銅離子的轉(zhuǎn)運體，在調(diào)節(jié)銅的穩(wěn)態(tài)過程中起著關(guān)鍵作用，同時也是酵母和哺乳動物中攝取順鉑的關(guān)鍵分子。
　　核心巖藻糖基化是由核心巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶(Fut8)催化下進(jìn)行的。核心巖藻糖基化通過改變糖蛋白的構(gòu)象、定位及表達(dá)，在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮重要生理作用。核心巖藻糖基化可以調(diào)節(jié)細(xì)胞表面蛋白CTR1與鉑類之間的相互作用，進(jìn)而影響癌細(xì)胞的鉑類藥物攝

3、取及耐藥性的獲得。CTR1介導(dǎo)的順鉑攝取依賴于其金屬結(jié)合外顯子結(jié)構(gòu)域，由于該結(jié)構(gòu)域具有N-糖基化位點，推測N-糖基化與順鉑攝入密切相關(guān)，而CTR1核心巖藻糖基化在卵巢癌中的順鉑攝取和鉑的耐藥作用機(jī)理尚未闡明。
　　目的:闡明CTR1核心巖藻糖基化與卵巢癌順鉑耐藥機(jī)制的相關(guān)性。
　　方法:通過凝集素印記方法檢測卵巢癌患者和正常人血清之間核心巖藻糖基化水平差異。通過凝集素印記、qPCR、MTT、細(xì)胞周期以及細(xì)胞凋亡等實驗方法檢測

4、順鉑敏感型細(xì)胞與順鉑耐藥性細(xì)胞對順鉑的敏感性。在卵巢癌患者的病理切片中，通過免疫組化的方法檢測癌組織與癌旁組織的CTR1的表達(dá)的差異，同時，用流式細(xì)胞術(shù)、免疫沉淀、電感耦合等離子體質(zhì)譜以及檢測CTR1與順鉑之間的相互作用。然后，通過構(gòu)建核心巖藻糖敲除的特定細(xì)胞系以及恢復(fù)模型，進(jìn)一步的驗證核心巖藻糖基修飾與順鉑耐藥性之間的關(guān)系。最后，利用磷酸化的實驗，研究卵巢癌細(xì)胞以及小鼠的卵巢上皮細(xì)胞的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。
　　結(jié)果:在血清的檢測中，與

5、正常人相比，卵巢癌患者的血清中核心巖藻糖基化水平明顯增多。順鉑化療的患者血清中核心巖藻糖基化水平明顯高于正常人和未經(jīng)過化療的患者的血清。在卵巢癌的細(xì)胞系中，順鉑耐藥型細(xì)胞的核心巖藻糖基化水平明顯高于順鉑敏感型細(xì)胞，并且，經(jīng)過順鉑處理之后，與敏感性細(xì)胞相比，耐藥型細(xì)胞的存活率高、細(xì)胞凋亡率低。雖然CTR1在細(xì)胞膜上的表達(dá)在兩種細(xì)胞中無明顯的差異，但順鉑耐藥型細(xì)胞的核心巖藻糖基化水平要明顯的高于順鉑敏感型細(xì)胞。與順鉑敏感型細(xì)胞相比，順鉑耐藥

6、型細(xì)胞膜表面CTR1與順鉑之間的相互作用明顯減弱。還有，在順鉑耐藥型細(xì)胞中，鉑的吸收量明顯低于順鉑敏感型細(xì)胞。在小鼠卵巢上皮細(xì)胞中，核心巖藻糖基化修飾的缺失促進(jìn)細(xì)胞對順鉑的攝取。
　　結(jié)論:順鉑耐藥型細(xì)胞中CTR1的核心巖藻糖基化水平顯著高于順鉑敏感型細(xì)胞。高核巖藻糖基化抑制了CTR1與順鉑的相互作用及順鉑攝取。Fut8+/+卵巢上皮細(xì)胞相比，在Fut8-/-小鼠卵巢上皮細(xì)胞中順鉑的攝取量明顯增多，而在Fut8基因恢復(fù)細(xì)胞模型中順