兒童過敏性紫癜的致病基因研究.pdf

1、目的：
　　探討過敏性紫癜（Henoch-Schonlein purpura，HSP）患兒外周血單個核細胞（Peripheral blood mononuclear cell，PBMC）中C1GALT1及Cosmc mRNA表達量與臨床的相關(guān)性以及HSP患兒是否存在Cosmc基因突變和突變與HSP發(fā)病的關(guān)聯(lián)性。此外，基于一對兒童期共患HSP的父子進行全外顯子組測序分析，篩選出可能與HSP發(fā)病相關(guān)的致病基因，隨后在93例HSP患兒中

2、予以驗證。
　　方法：
　　收集31例HSP患兒的外周血樣本和臨床資料，Trizol試劑提取PBMC中的RNA，加1ug RNA通過逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，然后利用RT-PCR法檢測PBMC中C1GALT1及Cosmc mRNA表達量。擴大HSP樣本至84例，利用Trizol法提取PBMC中的DNA，并通過Touch down PCR對Cosmc基因的外顯子進行測序。通過對一對兒童期共患HSP的父子進行全外顯子組測序，篩選出可能

3、與HSP發(fā)病相關(guān)的基因，然后在93例HSP患兒中通過PCR的方法驗證篩選出的基因是否存在突變。
　　結(jié)果：
　　正常對照組及非HSPN組和HSPN組的C1GALT1 mRNA2-ΔCt值分別為0.01716±0.00896、0.01392±0.00478、0.00999±0.00269，Cosmc mRNA2-ΔCt值分別為0.00319±0.00143、0.00266±0.00099、0.00241±0.00052；與對照

4、組相比，非HSPN組和HSPN組患者C1GALT1及Cosmc mRNA的表達水平呈下降趨勢，HSPN更為明顯，但統(tǒng)計學(xué)顯示無顯著性差異（p>0.05）。HSP患兒Cosmc基因存在兩個位點的突變，分別為c.393T>A和c.72 A>G；這2個突變位點的各基因型、等位基因頻率在 HSP與對照組中的分布無顯著性差異，在不同性別中亦如此。全基因組測序篩選出MIF基因和MGAT5基因可能與HSP的發(fā)病相關(guān)聯(lián)。93例HSP患兒中驗證結(jié)果顯示M

5、IF基因存在3個錯義突變，分別為c.282-6C>G、c.338C>CT和c.295T>C；MGAT5基因存在3個同義突變（c.142C>CT，c.348A>AG，c.267A>AG）和2個錯義突變（c.1117A>AG，c.673C>G）。c.282-6C>G變異位點位于MIF基因剪接區(qū)且35例HSP患兒（37.6%）攜帶該突變位點，這與歐洲人群（32.2%）及東亞人群中（28.6%）的頻率相近，且該等位基因頻率>3%被認為是SNP位

6、點，與HSP發(fā)病可能并無關(guān)聯(lián)。此外，2例出現(xiàn)c.338C>CT突變位點，1例出現(xiàn)c.295T>C突變位點。這2個位點在HSP中的突變率（2.15%、1.08%）遠遠高于東亞人群及歐洲人群的比例且這3名患者臨床癥狀較為嚴重，需要足量激素或激素聯(lián)合免疫抑制劑治療，提示MIF基因突變可能與HSP的發(fā)病、疾病嚴重程度以及激素的治療劑量和激素抵抗有關(guān)。關(guān)于MGAT5基因，3個同義突變并不會引起氨基酸的改變，亦不會引起MGAT5蛋白結(jié)構(gòu)和功能的變化

7、，因此認為與HSP發(fā)病無關(guān)聯(lián)。而c.1117A>AG，c.673C>G這2個突變位點各存在于1名HSP患兒中，其在HSP患者中的發(fā)病率（1.08%）遠遠高于東亞及歐洲人群。發(fā)生這2個突變位點的HSP患兒臨床癥狀也較為嚴重，且激素治療時間長，可提示MGAT5基因突變可能與HSP的疾病嚴重程度及激素用藥時間有關(guān)。
　　結(jié)論：
　　患兒外周血單個核細胞中C1GALT1及Cosmc mRNA的表達量可能與HSPN密切相關(guān)；HSP病人