血當歸粗提物體外成骨活性研究.pdf

1、促進骨損傷修復藥物的開發(fā)一直是當前生物醫(yī)學界熱門研究方向之一。從中藥中提取毒副作用小的相關藥物并研究其機理具有十分重要的理論意義和臨床應用前景。血當歸為我國土家族民間常用的藥材，具有活血通經(jīng)等功效。特別是血當歸在治療骨折、跌打損傷等有顯著療效。但其有效成分是什么，有效成分作用的機理是什么？目前知之甚少。
　　 本研究以傳統(tǒng)中藥血當歸粗提物為材料，用小鼠成骨細胞為細胞模型，研究其對體外培養(yǎng)的成骨細胞活性的影響，以期為鑒定其活性成分

2、及了解作用機理提供實驗依據(jù)。
　　 將血當歸用甲醇、乙酸乙酯等抽提，分別獲得其甲醇提取物、乙酸乙酯提取物和水提取物，用各提取物處理體外培養(yǎng)的小鼠成骨細胞，研究這些藥物對成骨細胞生長及成骨活性的影響。
　　 從新生的昆明小鼠顱蓋骨分離原代小鼠成骨細胞，用含10％新生小牛血清的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)。分別用1.0×10-2、10-3、10-4、10-5 mg/ml血當歸甲醇提取物、乙酸乙酯提取物、水提取物處理成骨細胞。研究血當歸

3、甲醇提取物、乙酸乙酯提取物、水提取物各個濃度對成骨細胞增殖活性、細胞周期以及其堿性磷酸酶活性的影響。用CCK-8法研究血當歸粗提物對成骨細胞增殖活性的影響。結果顯示，1.0×10-3、1.0×10-4和1.0×10-5mg/ml的血當歸甲醇提取物，1.0×10-3、1.0×10-4、、1.0×10-5mg/ml乙酸乙酯提取物和1.0×10-3、1.0×10-4、1.0×10-5mg/ml水提取物能夠促進成骨細胞的增殖（p<0.05）。用

4、流式細胞術研究血當歸粗提物對成骨細胞細胞周期的影響。結果表明，1.0×10-4mg/ml的血當歸甲醇提取物，1.0×10-3、1.0×10-4和1.0×10-5mg/ml的乙酸乙酯提取物，以及1.0x10-2、1.0x10-3、1.0x10-4mg/ml的水提取物能促進成骨細胞的進入細胞周期的S期,細胞增殖指數(shù)較高。其他實驗組無顯著的差別。用堿性磷酸酶試劑盒檢測受到血當歸1.0×10-3、10-4 mg/ml甲醇提取物，1.0×10-3