血當(dāng)歸粗提物體外成骨活性研究.pdf

1、促進(jìn)骨損傷修復(fù)藥物的開(kāi)發(fā)一直是當(dāng)前生物醫(yī)學(xué)界熱門(mén)研究方向之一。從中藥中提取毒副作用小的相關(guān)藥物并研究其機(jī)理具有十分重要的理論意義和臨床應(yīng)用前景。血當(dāng)歸為我國(guó)土家族民間常用的藥材，具有活血通經(jīng)等功效。特別是血當(dāng)歸在治療骨折、跌打損傷等有顯著療效。但其有效成分是什么，有效成分作用的機(jī)理是什么？目前知之甚少。
　　 本研究以傳統(tǒng)中藥血當(dāng)歸粗提物為材料，用小鼠成骨細(xì)胞為細(xì)胞模型，研究其對(duì)體外培養(yǎng)的成骨細(xì)胞活性的影響，以期為鑒定其活性成分

2、及了解作用機(jī)理提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 將血當(dāng)歸用甲醇、乙酸乙酯等抽提，分別獲得其甲醇提取物、乙酸乙酯提取物和水提取物，用各提取物處理體外培養(yǎng)的小鼠成骨細(xì)胞，研究這些藥物對(duì)成骨細(xì)胞生長(zhǎng)及成骨活性的影響。
　　 從新生的昆明小鼠顱蓋骨分離原代小鼠成骨細(xì)胞，用含10％新生小牛血清的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)。分別用1.0×10-2、10-3、10-4、10-5 mg/ml血當(dāng)歸甲醇提取物、乙酸乙酯提取物、水提取物處理成骨細(xì)胞。研究血當(dāng)歸

3、甲醇提取物、乙酸乙酯提取物、水提取物各個(gè)濃度對(duì)成骨細(xì)胞增殖活性、細(xì)胞周期以及其堿性磷酸酶活性的影響。用CCK-8法研究血當(dāng)歸粗提物對(duì)成骨細(xì)胞增殖活性的影響。結(jié)果顯示，1.0×10-3、1.0×10-4和1.0×10-5mg/ml的血當(dāng)歸甲醇提取物，1.0×10-3、1.0×10-4、、1.0×10-5mg/ml乙酸乙酯提取物和1.0×10-3、1.0×10-4、1.0×10-5mg/ml水提取物能夠促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖（p<0.05）。用

4、流式細(xì)胞術(shù)研究血當(dāng)歸粗提物對(duì)成骨細(xì)胞細(xì)胞周期的影響。結(jié)果表明，1.0×10-4mg/ml的血當(dāng)歸甲醇提取物，1.0×10-3、1.0×10-4和1.0×10-5mg/ml的乙酸乙酯提取物，以及1.0x10-2、1.0x10-3、1.0x10-4mg/ml的水提取物能促進(jìn)成骨細(xì)胞的進(jìn)入細(xì)胞周期的S期,細(xì)胞增殖指數(shù)較高。其他實(shí)驗(yàn)組無(wú)顯著的差別。用堿性磷酸酶試劑盒檢測(cè)受到血當(dāng)歸1.0×10-3、10-4 mg/ml甲醇提取物，1.0×10-3