彌漫性毒性甲狀腺腫和橋本甲狀腺炎中細胞角蛋白-19、血管內皮生長因子-C、環(huán)氧化物-2和波形蛋白表達的病理學研究及橋本甲狀腺炎中雌激素受體和孕激素受體基因表達的研究.pdf

1、目的與方法：
　　 Graves病(Grave’s disease，GD)和橋本甲狀腺炎(Hashimoto’s Thyroiditis，HT)為器官特異性自身免疫性甲狀腺疾病(AITD)的兩種主要表現形式，其病理分型與間質淋巴細胞浸潤程度相關。根據間質淋巴組織浸潤程度將GD分為三型，其浸潤程度分別為：Ⅰ型(<10％)，Ⅱ型(10％～20％)，Ⅲ型(20％～40％)；根據Woolner’s分類法將HT分為三型，其淋巴組織浸潤程度

2、分別為：淋巴細胞型(Lymphoid type，L型：20％～40％)，嗜酸性上皮細胞型(Oxyphilic epithelium type，O型：40％～80％)，明顯上皮破壞型(Pronounced epithelium destruction type，P型：80％～100％)。國內外關于CK-19、VEGF-C、COX-2和Vimentin在甲狀腺乳頭狀癌和濾泡癌中的表達的研究報道較多，在良性病變AITD中的研究較少。本文第一部

3、分采用免疫組織化學方法對GD和HT中CK-19、VEGF-C、COX-2和Vimentin的表達進行檢測，通過分析四種指標在GD、HT中的表達，探討這四種指標的表達與GD和HT的診斷、鑒別診斷、淋巴細胞浸潤、病情進展之間的關系。CK19、VEGF-C、COX-2和Vimentin在GD、HT的陽性表達率的比較采用x2檢驗(Fisher檢驗)，陽性強度比較采用秩和檢驗。兩組等級資料的相關性采用雙變量相關分析(Bivariate)等級相關系

4、數(Spearman相關系數)非參數檢驗，GD和HT年齡比較采用兩獨立樣本的t檢驗。
　　 本文第二部分應用逆轉錄PCR(RT-PCR)和熒光定量PCR(SYBR GreenQRT-PCR)兩種方法分別定性和定量檢測HT、甲狀腺乳頭狀癌和結節(jié)性甲狀腺腫中雌激素受體(Estrogen receptor；ER)和孕激素受體(Progesterone receptor，PR)基因的表達情況，主要對職和PR與HT的相關性進行分析，探討性

5、激素與HT發(fā)病及病情嚴重程度的關系，為HT的臨床診斷和治療提供理論依據。熒光定量檢測的ER結果采用完全隨機設計下定量資料的方差分析。
　　 結果：
　　 1.GD、HT性別比(男/女)分別為1:5.33、1:18.33，GD性別比與HT的性別比經x2檢驗差異有顯著性(x2=27.32，P<0.05)。GD、HT平均確診年齡分別為31.72、45.67(歲)，經t檢驗差異有顯著性(t=-7.03，P<0.01)，GD男性平

6、均確診年齡(40.22歲)高于女性平均確診年齡(30.13歲)，經t檢驗差異有統(tǒng)計學意義(t=2.774，P<0.01)，HT男性平均確診年齡(51.67歲)高于女性平均確診年齡(45.35歲)，經t檢驗差異無統(tǒng)計學意義。
　　 2.CK-19主要表達于病變區(qū)甲狀腺濾泡上皮細胞的胞漿。HT中CK-19的陽性表達率(86.2％)顯著高于GD(43.9％)，GDⅢ型(81.3％)顯著高于GDⅠ型(15.8％)，GDⅢ型顯著高于GDⅡ

7、型(40.9％)，HT-P型(100％)顯著高于HT-L型(66.7％)，以上差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。HT中CK-19的陽性表達強度高于GD，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 3.VEGF-C陽性物質主要表達于病變區(qū)甲狀腺濾泡上皮的胞漿中。HT中VEGF-C的陽性表達率(96.6％)顯著高于GD(56.1％)，GDⅢ型陽性率(87.5％)顯著高于GDⅠ型(36.84％)，GDⅢ型顯著高于GDⅡ型(50.096

8、)，以上差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。HT中VEGF-C的陽性表達強度顯著高于GD，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 4.GD、HT各型的甲狀腺濾泡上皮細胞中均可見到COX-2的陽性免疫反應，分布于胞漿中。GD中COX-2的陽性表達率(91.2％)與HT(93.1％)相近，但HT的陽性表達強度顯著高于GD，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。GD各型的陽性率分別為GDⅠ型89.5％，GDⅡ型90.9％，GDⅢ型93.

9、8％，陽性率相近。HT各型的陽性率分別為HT-L型85.7％，HT-O型94.7％，HT-P型100.0％，陽性率亦相近，其中HT-O型的陽性表達強度顯著高于HT-L型，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 5.Vimentin陽性表達主要見于GD和HT的濾泡上皮細胞間的間質和部分濾泡上皮細胞胞漿中。GD和HT中Vimentin的陽性表達率均為100％，Vimentin在GD中的陽性表達強度略高于HT，差異無統(tǒng)計學意義(P<

10、0.05)。
　　 6.GD中43.9％的病例CK-19和Vimentin表達一致(同時陽性或同時陰性)，經過Spearman等級相關分析，相關系數r=0.223(P>0.05)。HT中86.2％的病例CK-19和Vimenitn表達一致，經過Spearman等級相關分析，相關系數r=0.113(P>0.05)。GD中61.4％病例VEGF-C和COX-2表達一致，經過Spearman等級相關分析，相關系數r=0.209(P>0

11、.05)。HT中93.1％的病例VEGF-C和COX-2表達一致，經過Spearman等級相關分析，兩者在HT中的表達呈正相關關系，相關系數r=0.552(P<0.05)。
　　 7.RT-PCR結果顯示HT、甲狀腺乳頭狀癌和結節(jié)性甲狀腺腫在100～250bp之間均可見ER陽性目的條帶，均未見PR陽性目的條帶。HT的ER陽性率為100％(2/2)，甲狀腺乳頭狀癌的ER陽性率為14％(1/7)，結節(jié)性甲狀腺腫的ER陽性率為80％(

12、4/5)。
　　 8.熒光定量PCR結果顯示，HT中ER的表達量高于甲狀腺乳頭狀癌和結節(jié)性甲狀腺腫。HT與結節(jié)性甲狀腺腫間，HT與甲狀腺乳頭狀癌間，甲狀腺乳頭狀癌與結節(jié)性甲狀腺腫間ER表達量差別均無統(tǒng)計學意義。
　　 結論：
　　 1.GD平均確診年齡(31.72歲)低于HT(45.67歲)，差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，提示隨著病情由GD向HT不斷進展，浸潤程度不斷增加，患者的確診年齡也逐漸增高。GD男性平

13、均確診年齡(40.22歲)高于女性(30.13歲)，差異有統(tǒng)計學意義。由此提示不同性別GD的發(fā)病年齡有差別，男性發(fā)病年齡較大。GD、HT性別比(男/女)分別為1:5.33、1:18.33，GD性別比與HT的性別比經x2檢驗差異有顯著性(P<0.05)，提示GD和HT均以女性多發(fā)，HT的性別差異更大。
　　 2.GD和HT各型中淋巴細胞浸潤程度呈現連續(xù)性的變化，即GDⅢ>GDⅡ型>GDⅠ型，HT-P型>HT-O型>HT-L型，CK

14、-19、VEGF-C、COX-2陽性表達率和陽性表達強度亦有同樣的變化趨勢，提示這三種指標在ATID中的表達水平與其淋巴細胞浸潤程度有關。Vimentin在GD和HT各型中的陽性表達率均為100％，且陽性表達強度相近，與其淋巴細胞浸潤程度無關。
　　 3.GD中61.4％病例VEGF-C和COX-2表達一致，但兩者無相關關系，HT中93.1％的病例VEGF-C和COX-2表達一致，兩者在HT中的表達呈正相關關系。HT相對于GD有

15、更多的淋巴細胞浸潤，提示在HT中COX-2似乎也能上調VEGF-C的表達，促進淋巴細胞由血管和淋巴管遷移到甲狀腺組織，加重組織的淋巴細胞浸潤和破壞。
　　 4.綜合檢測CK-19、VEGF-C、COX-2和Vimentin對于GD、HT的診斷、治療、疾病監(jiān)測、評估預后等具有重要的臨床意義。GD、HT中CK-19、VEGF-C、COX-2和Vimentin各指標在疾病發(fā)展中的作用及它們之間的具體關系有待于進一步研究。
　　

16、 5.RT-PCR結果顯示ER在HT、甲狀腺乳頭狀癌和結節(jié)性甲狀腺腫中均有一定程度的表達，實時定量結果分析顯示HT中的表達量較高，但三者間ER的表達量的差別沒有統(tǒng)計學意義。ER在HT、甲狀腺乳頭狀癌和結節(jié)性甲狀腺腫中表達，雌激素通過作用于ER而發(fā)揮相應的生物學作用，因此雌激素與這三種甲狀腺疾病的發(fā)病及病情進展有密切的關系，尤其是與HT的關系更密切。PR在HT、甲狀腺乳頭狀癌和結節(jié)性甲狀腺腫三種疾病中未檢測到表達，可能的原因是這三種甲狀腺