利拉魯肽對(duì)高脂喂養(yǎng)大鼠棕色脂肪組織標(biāo)志性基因表達(dá)的影響.pdf

1、肥胖是由多種因素引起的以體內(nèi)脂肪細(xì)胞的體積和數(shù)量增加為特點(diǎn)的一種臨床狀態(tài)，它是眾多疾?。ㄈ?型糖尿病、代謝綜合征、心血管疾病、非酒精性脂肪肝等）的一個(gè)重要風(fēng)險(xiǎn)因素。但是，體內(nèi)的脂肪組織并不都是“有害”的。
　　根據(jù)脂肪細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的不同，哺乳動(dòng)物體內(nèi)的脂肪組織分為兩種：白色脂肪組織（WAT）和棕色脂肪組織（BAT）。WAT即我們通常所說的脂肪組織，廣泛分布于皮下和內(nèi)臟周圍，主要由白色脂肪細(xì)胞聚集而成，其功能是將體內(nèi)過剩的能量以甘

2、油三酯的形式儲(chǔ)存起來；BAT主要分布于頸背部、腋窩及肩胛間區(qū)，由棕色脂肪細(xì)胞組成，細(xì)胞內(nèi)含有豐富的線粒體，棕色脂肪的主要生理作用是非寒顫性產(chǎn)熱，可通過解偶聯(lián)作用將體內(nèi)過多的脂肪分解和消耗。除了經(jīng)典的棕色脂肪細(xì)胞和白色脂肪細(xì)胞，最近人們發(fā)現(xiàn)了一種米色脂肪細(xì)胞，它是在某些刺激條件下，“白色脂肪棕色化”過程中產(chǎn)生的存在于白色脂肪組織中的“棕色樣”脂肪細(xì)胞，與經(jīng)典的棕色脂肪細(xì)胞有著相似的作用。
　　利拉魯肽是人胰高血糖素樣肽-1（GLP-

3、1）的一種類似物，它能夠以葡萄糖濃度依賴的模式刺激胰島素的分泌，同時(shí)以葡萄糖濃度依賴的模式降低過高的胰高糖素的分泌。因此，臨床上利拉魯肽主要用于治療2型糖尿病。但是，最近有研究發(fā)現(xiàn)，GLP-1可促進(jìn)棕色脂肪前體細(xì)胞向成熟的棕色脂肪細(xì)胞分化，并且通過腦室內(nèi)注射GLP-1受體激動(dòng)劑可增加棕色脂肪組織活性，促進(jìn)棕色脂肪組織產(chǎn)熱。
　　本課題通過對(duì)高脂喂養(yǎng)大鼠注射利拉魯肽，并檢測(cè)其棕色脂肪組織中標(biāo)志性基因蛋白及mRNA的表達(dá)，探討了利拉魯

4、肽對(duì)棕色脂肪功能的影響，揭示了利拉魯肽減肥作用的可能機(jī)制。本研究可為未來臨床上肥胖及其相關(guān)代謝性疾病的預(yù)防和治療提供新的思路。
　　目的：研究利拉魯肽對(duì)高脂喂養(yǎng)大鼠棕色脂肪組織中標(biāo)志性基因表達(dá)的影響，并探討利拉魯肽對(duì)這些基因表達(dá)的影響與其濃度的關(guān)系。
　　方法：清潔級(jí)健康雄性SD大鼠40只（體重240g-260g），適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后隨機(jī)分為5組：正常對(duì)照組（Con）、高脂對(duì)照組（HF）、利拉魯肽低劑量組（Lira-L）（0.

5、4mg/kg/d）、利拉魯肽中劑量組（Lira-M）（0.6mg/kg/d）、利拉魯肽高劑量組（Lira-H）（0.8mg/kg/d），每組8只。正常對(duì)照組給予普通飼料喂養(yǎng)，熱量組成：碳水化合物65.5％，脂肪10.3%，蛋白質(zhì)24.2%，總熱量為348kcal/100g；高脂對(duì)照組及利拉魯肽低、中、高劑量組均給予高脂飼料喂養(yǎng)，熱量組成：碳水化合物20.1%，脂肪59.8%，蛋白質(zhì)20.1%，總熱量為501kcal/100g；每天給予各

6、組等熱量的普通飼料或高脂飼料。將6mg（1ml）利拉魯肽溶于11ml生理鹽水中，配制成濃度為0.5mg/ml的混合液，分別給予利拉魯肽低、中、高劑量組0.4mg/kg/d、0.6mg/kg/d、0.8mg/kg/d利拉魯肽日二次皮下注射，正常對(duì)照組及高脂對(duì)照組分別給予等量生理鹽水日二次皮下注射，分別干預(yù)12周。于12周末稱重后處死大鼠，留取血清及肩胛部棕色脂肪組織，稱量肩胛部棕色脂肪組織的重量；檢測(cè)血清生化學(xué)指標(biāo)；HE染色觀察大鼠棕色脂

7、肪組織形態(tài)學(xué)變化；Real-TimePCR檢測(cè)棕色脂肪組織中解偶聯(lián)蛋白-1（UCP1）、過氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPARγ）、細(xì)胞死亡誘導(dǎo)的DFFA樣效應(yīng)因子A（CIDEA）、過氧化物酶體增生物激活受體輔助活化因子1α（PGC-1α）、CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白β（CEBPβ）、PR結(jié)構(gòu)域家族的第16個(gè)成員（PRDM16）的mRNA表達(dá)水平；WesternBlot檢測(cè)棕色脂肪組織中UCP1、PPARγ、CIDEA、PGC-1α、CE

8、BPβ、PRDM16蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1.12周末大鼠體重及棕色脂肪重量的結(jié)果：
　　（1）體重：實(shí)驗(yàn)起始時(shí)各組大鼠體重?zé)o明顯差異，干預(yù)12周后，利拉魯肽低、中劑量組大鼠體重均明顯低于高脂對(duì)照組和正常對(duì)照組，利拉魯肽高劑量組大鼠體重低于高脂對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（Fig.1，Table1）（P＜0.05），但利拉魯肽低、中、高劑量組之間大鼠體重?zé)o統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　

9、（2）棕色脂肪重量：12周末棕色脂肪組織重量各組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　（3）棕色脂肪重量/體重：利拉魯肽低、中、高劑量組大鼠棕色脂肪重量/體重比值大于高脂對(duì)照組（P＜0.05），但利拉魯肽低、中、高劑量組之間比值無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　2.血清生化學(xué)指標(biāo)：
　　與正常對(duì)照組相比，高脂對(duì)照組血清葡萄糖、甘油三酯水平升高（P＜0.05）；利拉魯肽各組與高脂對(duì)照組相比，血清葡萄糖、甘油三酯水平下降

10、（P＜0.05），與正常對(duì)照組相比，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　3.HE染色結(jié)果：
　　利拉魯肽各組與高脂對(duì)照組相比，棕色脂肪細(xì)胞數(shù)量增加，棕色脂肪細(xì)胞內(nèi)的空泡相對(duì)較小，胞漿含量較多；與正常對(duì)照組相比，形態(tài)學(xué)上無明顯差異。
　　4.12周末大鼠棕色脂肪組織中標(biāo)志性基因分子水平的表達(dá)：
　　與正常對(duì)照組相比，高脂對(duì)照組大鼠棕色脂肪組織中UCP1、PPARγ、CIDEA、PGC-1α、CEBPβ、PRDM16

11、的mRNA表達(dá)下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05)；與高脂對(duì)照組相比，利拉魯肽干預(yù)后UCP1、PPARγ、CIDEA、PGC-1α、CEBPβ、PRDM16的mRNA表達(dá)上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05)；利拉魯肽各劑量組之間UCP1、PPARγ、CIDEA、PGC-1α、CEBPβ、PRDM16的mRNA表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　5.12周末大鼠棕色脂肪組織中標(biāo)志性基因蛋白水平的表達(dá)：
　　與正常對(duì)照

12、組相比，高脂對(duì)照組大鼠棕色脂肪組織中UCP1、PPARγ、CIDEA、PGC-1α、CEBPβ、PRDM16蛋白的表達(dá)水平下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05)；與高脂對(duì)照組相比，利拉魯肽干預(yù)后UCP1、PPARγ、CIDEA、PGC-1α、CEBPβ、PRDM16蛋白的表達(dá)上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05)；利拉魯肽各劑量組之間UCP1、PPARγ、CIDEA、PGC-1α、CEBPβ、PRDM16蛋白的表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0