一種新的Th2高表達(dá)蛋白——嗜中性顆粒蛋白(NGP)的表達(dá)、純化及其性質(zhì)與功能初探.pdf

1、CD4+T細(xì)胞根據(jù)其所分泌的細(xì)胞因子的不同,可以分成兩個亞類:Th1細(xì)胞和Th2細(xì)胞。Th1細(xì)胞主要分泌INF-γ、IL-2、TNF-α和TNF—β,對于細(xì)胞內(nèi)病原體例如單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)和利什曼原蟲(Leishmania major)的清除十分重要；而Th2細(xì)胞主要分泌IL-4、IL-13、IL-5、IL-6、IL-10和IL-9,從而誘導(dǎo)體液反應(yīng)去清除腸內(nèi)蠕蟲和線蟲等寄生蟲。體內(nèi)

2、Th1和Th2的平衡在維護機體免疫狀態(tài)平衡、調(diào)節(jié)生理機能、防御感染、監(jiān)視腫瘤等多方面具有重要的意義。若朝向Th1分化的細(xì)胞過量,將導(dǎo)致自身免疫性疾病的發(fā)生；反之,若Th2過于活躍,則會導(dǎo)致過敏和哮喘的發(fā)生。
　　 盡管近幾年人們對輔助性T細(xì)胞分化的認(rèn)識有了很大的提高,但仍然存在一些問題。我們實驗室應(yīng)用高通量基因芯片技術(shù)對Th1和Th2的基因表達(dá)譜進行了研究,結(jié)果發(fā)現(xiàn)了一種新的Th2高表達(dá)基因——嗜中性顆粒蛋白(NGP)基因；并且

3、通過RT—PCR、實時定量PCR進一步確認(rèn)NGP的確在Th2細(xì)胞中的高表達(dá)。由此推斷NGP可能在輔助性T細(xì)胞的分化中發(fā)揮某種功能。將NGP克隆入質(zhì)粒pEGFP—N1后,利用激光共聚焦熒光顯微鏡技術(shù),發(fā)現(xiàn)融合表達(dá)的NGP—GFP定位于細(xì)胞質(zhì)中,并且轉(zhuǎn)染了NGP—pEGFP—N1的293T細(xì)胞的上清液可以抑制OVA誘導(dǎo)的小鼠脾細(xì)胞的增殖。為了進一步對NGP進行功能研究,表達(dá)純化了NGP—GST融合蛋白,同時制備了抗體。經(jīng)過westernbl