鋅指蛋白ZNF191（243-368）的表達(dá)、純化及其性質(zhì)研究.pdf

1、本文對鋅指蛋白ZNF191（243-368）的表達(dá)、純化及其性質(zhì)進(jìn)行了研究。文章得到了ZNF191(243-368)的DNA結(jié)合序列，并對ZNF191(243-368)及它的幾個突變體蛋白進(jìn)行了表達(dá)、純化與性質(zhì)研究，但是單個鋅指的表達(dá)純化在這兩個體系中均不成功，而每個鋅指的性質(zhì)與結(jié)構(gòu)到底有什么差別，仍然是我們主要關(guān)心的問題之一。為了得到單一的鋅指蛋白，又嘗試了酮類固醇異構(gòu)酶(ketosteroidisomerase，KSI)表達(dá)體系。以

2、pET-31b為載體，在KSI的C-端分別引入了鋅指3(ZF3)和鋅指4(ZF4)的基因。KSI的協(xié)同表達(dá)作用以及難溶性，使得KSI與鋅指的融合蛋白的表達(dá)水平很高，并且主要是以包涵體的形式存在，有效地防止了結(jié)構(gòu)簡單的單一鋅指被蛋白水解酶所降解。破菌后的沉淀用不同濃度的尿素緩沖溶液進(jìn)行洗滌，就可得到大量的、純度較高的包涵體融合蛋白(純度在80﹪以上)，而且該融合蛋白可直接用于CNBr裂分。根據(jù)KSI與單一鋅指在分子量上的差異進(jìn)行分離，就可